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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求助：关于提质粒
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wohenaini

木虫 (小有名气)

[交流] 新手求助：关于提质粒

提的质粒跑出来的条带总是有拖尾，而且看不出所谓的超螺旋和其他构型的条带

我们四五个人一起当作练习做的 ，结果都是这样。
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1楼 2012-03-19 10:20:26
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
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2楼2012-03-19 10:33:17
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wohenaini

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 198903133397 at 2012-03-19 10:33:17:
怎么感觉你的胶放在冰箱里面冻过

没有啊 跑好了就去照相的，
冰箱冻过会有什么反应啊？
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3楼2012-03-19 10:47:27
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ken126

新虫 (小有名气)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
有没有检查过TAE buffer?
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4楼2012-03-19 10:47:46
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wohenaini

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ken126 at 2012-03-19 10:47:46:
有没有检查过TAE buffer?

没有用TAE啊，都是用的Tris-HCl的buffer。
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5楼2012-03-19 10:50:03
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ken126

新虫 (小有名气)
★
wohenaini: 金币+1 2012-03-19 11:23:46
是否跑胶是电压过高？buffer使用时间过长？
你们的胶为什么会有划痕状痕迹？
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6楼2012-03-19 10:59:34
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wohenaini

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ken126 at 2012-03-19 10:59:34:
是否跑胶是电压过高？buffer使用时间过长？
你们的胶为什么会有划痕状痕迹？

划痕应该是下面铺的保鲜膜。
电压是120v，buffer用的时间不长啊，用的久了会有什么影响啊？
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7楼2012-03-19 11:06:15
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
并不是每次提都会出现两条或三条带的。提取的时候不要震荡得太厉害。试下把点样的量减少，或稀释一下再跑胶，看看条带会不会好一点？
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8楼2012-03-19 13:51:09
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dinghonglan

新虫 (初入文坛)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
好像有蛋白质或基因组污染，提取过程去除蛋白和基因组注意一下，另外上样量太大，可以减少上样量，电泳时间缩短一些试试
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9楼2012-03-19 14:34:04
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zx6291

铜虫 (小有名气)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
用新鲜的胶再重新跑吧，应该是胶时间长了
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10楼2012-03-19 15:02:10
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hardmoon

新虫 (初入文坛)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
首先跑电泳时间要缩短，你的Marker跑得也很长。其次，加完溶液I要混合均匀，但加完裂解液和溶液3都不要剧烈震荡，否则会有RNA污染，基因组也很难复性，建议你找一些体质粒的SOP看看，或者参考一些试剂盒说明书。
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11楼2012-03-19 15:05:56
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枫叶落不落

金虫 (正式写手)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
电泳缓冲液重新配一下
胶重新配一下
上样量可以适当减少
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12楼2012-03-19 17:27:48
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dajiong

金虫 (正式写手)
★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
电泳加样加了多少微升啊？
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13楼2012-03-19 23:48:39
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王雨云

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
wohenaini(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-03-21 19:01:37
应该是有基因组或者蛋白污染，孔里面都还有亮的物质加脱尾那部分。提质粒的时候特别是碱裂解过程不要太剧烈，一般用试剂盒提出来的质粒比较浓，质粒3微升足以，新配一次电极缓冲液试试吧。电泳电压根据你实际条带的大小来调整吧，条带大电压可适当调大点，节约时间，
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14楼2012-03-20 14:59:16
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猫迷迷糊

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看看是不是加试剂时间过长呀？
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15楼2012-03-21 14:34:47
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winter227

新虫 (初入文坛)
有时跑出来是这样的啊
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16楼2012-03-21 16:58:37
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