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黑沉

金虫 (正式写手)

[交流] 大家都是用的什么公司的点突变试剂盒啊? 已有6人参与

如题,我最近要开始构建很多个点突变的全长,想咨询一下大家,用哪个公司的试剂盒好些?!多谢……
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zfj20110603

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 黑沉 at 2013-08-28 08:08:22
对啊,到目前为止已经做过20多个单点突变了,命中率至少3/4吧,前提是PCR能扩增出很亮的目的条带。我一般是PCR-回收纯化目的条带-DpnI处理1h-转化。过程其实很简单,就是看PCR这步,所以突变引物的质量很重要。希望 ...

你的模板是质粒吗?有多长啊?酶的话用的哪个公司的哪种酶啊?我以前用过试剂盒做过15k质粒的单点突变,结果试剂盒时间久了不好用了,他们公司也不生产了,现在有个不到7k的质粒要做突变,一直还没做出来呢。
8楼2013-08-28 14:59:56
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黑沉

金虫 (正式写手)

stratagene quikchange的怎样?
2楼2012-03-15 08:16:05
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黑沉

金虫 (正式写手)

没人指点下啊……
3楼2012-03-16 21:18:42
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临风7071

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黑沉 at 2012-03-15 08:16:05:
stratagene quikchange的怎样?

那是非常好的试剂盒,国内的赛百盛也很好的
4楼2012-03-17 11:17:31
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黑沉

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 临风7071 at 2012-03-17 11:17:31:
那是非常好的试剂盒,国内的赛百盛也很好的

谢啦,暂时先不用盒子了,直接买酶自己做咯……
5楼2012-03-19 23:16:34
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zfj20110603

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黑沉 at 2012-03-19 23:16:34
谢啦,暂时先不用盒子了,直接买酶自己做咯……...

楼主自己买酶做出来了吗?
6楼2013-08-27 13:10:04
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黑沉

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by zfj20110603 at 2013-08-27 13:10:04
楼主自己买酶做出来了吗?...

对啊,到目前为止已经做过20多个单点突变了,命中率至少3/4吧,前提是PCR能扩增出很亮的目的条带。我一般是PCR-回收纯化目的条带-DpnI处理1h-转化。过程其实很简单,就是看PCR这步,所以突变引物的质量很重要。希望能帮到你……
7楼2013-08-28 08:08:22
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黑沉

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zfj20110603 at 2013-08-28 14:59:56
你的模板是质粒吗?有多长啊?酶的话用的哪个公司的哪种酶啊?我以前用过试剂盒做过15k质粒的单点突变,结果试剂盒时间久了不好用了,他们公司也不生产了,现在有个不到7k的质粒要做突变,一直还没做出来呢。...

我的是8k,质粒,phusion超高保真。试剂盒太贵了……祝你顺利!
9楼2013-08-28 15:43:29
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xiaoyan_feng

新虫 (初入文坛)

怎么设计引物啊
10楼2014-07-14 14:36:43
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