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测定β-半乳糖苷酶酶活为什么重复性差？？求高人指点
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跟一公司申请的乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶，测定酶活的方法如下： 1)在5mL离心管中加入1.8mL特定的缓冲液(50mM)，再加入100uL稀释到一定倍数的酶液，37oC下预热10min； 2)加入ONPG(邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷，20mM)100uL后开始计时反应10min； 3)加入Na2CO3(1mol/L)1mL终止反应； 4)在420nm处测定吸光值，根据ONP(邻-硝基苯酚)标准曲线计算酶活； 酶活定义为：每分钟催化产生1μmol ONP的酶量为一个活力U。 测定酶活结果如下（单位：U/mL）： 3.88 、2.38 、4.55 、1.98 、3.84 、2.58 测了好多次了，但就是测不出好的重复性，现在实在找不到原因所在，求高人指点，本人将不胜感激！ [ Last edited by dl19871205 on 2012-3-10 at 14:25 ] |
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