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dl19871205

银虫 (小有名气)


[交流] 测定β-半乳糖苷酶酶活为什么重复性差??求高人指点

跟一公司申请的乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶,测定酶活的方法如下:
1)在5mL离心管中加入1.8mL特定的缓冲液(50mM),再加入100uL稀释到一定倍数的酶液,37oC下预热10min;
2)加入ONPG(邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷,20mM)100uL后开始计时反应10min;
3)加入Na2CO3(1mol/L)1mL终止反应;
4)在420nm处测定吸光值,根据ONP(邻-硝基苯酚)标准曲线计算酶活;
酶活定义为:每分钟催化产生1μmol ONP的酶量为一个活力U。
测定酶活结果如下(单位:U/mL):
3.88 、2.38 、4.55 、1.98 、3.84 、2.58
测了好多次了,但就是测不出好的重复性,现在实在找不到原因所在,求高人指点,本人将不胜感激!

[ Last edited by dl19871205 on 2012-3-10 at 14:25 ]
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laicongxian

新虫 (初入文坛)



dl19871205(金币+1): 谢谢参与
为什么我用蒸馏水配制的ONPG过了一夜也没有颜色变化,是在sigma买的,难道是药品有问题吗?
10楼2012-04-21 13:41:05
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