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dl19871205

银虫 (小有名气)


[交流] 测定β-半乳糖苷酶酶活为什么重复性差??求高人指点

跟一公司申请的乳酸克鲁维酵母产β-半乳糖苷酶,测定酶活的方法如下:
1)在5mL离心管中加入1.8mL特定的缓冲液(50mM),再加入100uL稀释到一定倍数的酶液,37oC下预热10min;
2)加入ONPG(邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷,20mM)100uL后开始计时反应10min;
3)加入Na2CO3(1mol/L)1mL终止反应;
4)在420nm处测定吸光值,根据ONP(邻-硝基苯酚)标准曲线计算酶活;
酶活定义为:每分钟催化产生1μmol ONP的酶量为一个活力U。
测定酶活结果如下(单位:U/mL):
3.88 、2.38 、4.55 、1.98 、3.84 、2.58
测了好多次了,但就是测不出好的重复性,现在实在找不到原因所在,求高人指点,本人将不胜感激!

[ Last edited by dl19871205 on 2012-3-10 at 14:25 ]
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dongxie1982

铜虫 (正式写手)



dl19871205(金币+1): 谢谢参与
个人认为是β-半乳糖苷酶的问题,可能活性不够稳定,之前也做过该实验,试剂全是新的,但老是做不出比较好的结果,换另外一家试剂公司的酶就好了,可以试试
4楼2012-03-11 17:42:02
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查看全部 18 个回答

swqowen

金虫 (职业作家)



dl19871205(金币+1):谢谢参与
酶活实验有大量的误差,生物酶公司实验室一般控制平行试验误差为8%,所以,一般上我们普通实验室控制在15%之内还是可以的!我就是做这块的!:
3楼2012-03-11 16:20:25
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dl19871205

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 卷舒_ray at 2012-03-10 18:55:32:
帮你顶。

可是我的酶活测出来相对误差好大啊,可以留个联系方式交流一下么?

[ Last edited by dl19871205 on 2012-3-11 at 22:17 ]
5楼2012-03-11 22:16:31
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biolio2009

木虫 (著名写手)



dl19871205(金币+1): 谢谢参与
你能不能把时间延长一下,这样测定的酶活估计就会比较稳定了,
还有就是这个酶的问题,换另外公司的产品
6楼2012-03-12 08:39:34
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