24小时热门版块排行榜    

查看: 1557  |  回复: 4

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] 关于表达的问题

各位大虾你们好!我最近做表达,一直没结果,我做的是串联表达,我在原来三个重复串联片段的基础上延长成六个重复,12个重复,结果六个重复的片段诱导条件的优化有目的蛋白表达,而12重复的却一直没有,我用的pET30a(+)载体,6个重复片段加上载体序列表达蛋白是22.2KD,12重复片段加上载体序列表达蛋白大小应该是38.1KD,但是在这个位置我一直做出的结果是未诱导的条带比诱导的还粗,后来我又用个空菌落BL21也做个对照,结果它在那个位置也有条带!这应该如何办啊,是不是就证明表达不出来啊!请各位高手给于小妹指导一下,万分感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
XUMIN6891(金币+1): 2012-03-07 21:23:24
上图才好帮你分析。
首先,肯定序列完全正确吗?重复序列在克隆时容易出错的。
其次,将六个重复和12个重复的载体,进行一个平行的实验,看看各自的表达情况。
2楼2012-03-06 21:42:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2012-03-06 21:42:04:
上图才好帮你分析。
首先,肯定序列完全正确吗?重复序列在克隆时容易出错的。
其次,将六个重复和12个重复的载体,进行一个平行的实验,看看各自的表达情况。

测序是完全正确的这点可以排除,另外你说的那个将六个重复和12个重复的载体,进行一个平行的实验是啥意思,我不懂呃,指教一下吧!谢了!
3楼2012-03-06 21:53:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2012-03-08 08:35:24
平行试验: 就是在完全相同的条件下,对两种不同的质粒进行转化,单克隆培养,诱导表达,SDS-PAGE分析,看看其表达情况是否一致。以便判断是你试验操作的问题,还是质粒的问题。
4楼2012-03-06 22:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2012-03-06 22:07:18:
平行试验: 就是在完全相同的条件下,对两种不同的质粒进行转化,单克隆培养,诱导表达,SDS-PAGE分析,看看其表达情况是否一致。以便判断是你试验操作的问题,还是质粒的问题。

我那个六串联的表达出来的使用保存正确的菌液进行培养然后诱导表达的,今天我把12串联的的质粒进行转化,然后再准备单克隆培养再进行诱导表达,这样做等于没做平行试验,只是单纯的做12串联的,这样也行吧!
5楼2012-03-07 19:59:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 XUMIN6891 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +10 ziyangfang 2026-08-19 11/550 2026-08-19 17:19 by wdc28
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +53 医学老男孩 2026-08-13 117/5850 2026-08-19 17:12 by 医学老男孩
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +4 瞬息宇宙 2026-08-15 4/200 2026-08-19 16:23 by allmydream
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +8 kkkl_v 2026-08-19 8/400 2026-08-19 12:34 by Vivilian
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +8 启萌科技 2026-08-12 30/1500 2026-08-19 10:22 by 启萌科技
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
信息提示
请填处理意见