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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于菌液PCR的DNA模板制备，
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] 关于菌液PCR的DNA模板制备，

最近看了关于菌液pcr的DNA模板的制备，这种方法很简便，我们实验室条件有限，无液氮，目前考虑这种方法，实验室目前研究尖孢镰刀菌，看文献看过关于酵母菌的菌液pcr，愣是没找到关于尖孢镰刀菌的菌液PCR的DNA模板制备的方法，求关于尖孢镰刀菌的菌液PCR的DNA模板制备的方法，
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无所谓好或不好，人生一场虚空大梦，韶华白首，不过转瞬，惟有天道恒在，往复循环，不曾更改
1楼2012-03-05 15:40:22
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lw19850128

银虫 (小有名气)
我做农杆菌的菌液PCR直接用菌液代替DNA模版效果就挺好，不过镰刀菌由于特点不同是否适用需要你自己试验下
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5楼2012-10-09 09:30:56
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
无人问津

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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无所谓好或不好，人生一场虚空大梦，韶华白首，不过转瞬，惟有天道恒在，往复循环，不曾更改
2楼2012-03-10 06:12:46
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xstarsky

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
①25mg菌丝干粉于1.5mL离心管；
②加入500uL提取缓冲液（5mM/L Tris-HCl，pH8.0; 150mM/L NaCl，100mM/L EDTA）悬浮干粉，在涡流振荡器上混匀；
③加入50uL 10% SDS和2uL 20mg/mL的蛋白酶K，37℃温浴1h；
④加入75uL 5M/L NaCl和65uL CTAB/NaCl溶液，65℃温育20min；
⑤用等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提1次，10，000g离心10min，取上清液移至干净管中；
⑥将上清液，再加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）抽提1次；
⑦如水相与有机相之间仍有杂质，再重复抽提过程；
⑧上清液中加入0.6倍体积的异丙醇沉淀DNA（-20℃放置1-2h），10,000g离心10min；
⑨取沉淀，加70%乙醇洗1遍；
⑩真空干燥后将DNA溶解在TE缓冲液（10mM Tris-HCl,pH7.5; 0.1mMEDTA中，-70℃保存）。
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3楼2012-03-10 07:43:41
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bigboy123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做普通PCR，有一点DNA摸板就够用了。所以你取点细菌，随便煮煮就行了。不用搞那么复杂。最多离一下心，去去杂质。
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供应PCR增量剂
4楼2012-03-10 07:52:02
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