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uuu555000捐助贵宾 (正式写手)
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[求助]
关于菌液PCR的DNA模板制备，
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| 最近看了关于菌液pcr的DNA模板的制备，这种方法很简便，我们实验室条件有限，无液氮，目前考虑这种方法，实验室目前研究尖孢镰刀菌，看文献看过关于酵母菌的菌液pcr，愣是没找到关于尖孢镰刀菌的菌液PCR的DNA模板制备的方法，求关于尖孢镰刀菌的菌液PCR的DNA模板制备的方法， |
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【答案】应助回帖
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①25mg菌丝干粉于1.5mL离心管； ②加入500uL提取缓冲液（5mM/L Tris-HCl，pH8.0; 150mM/L NaCl，100mM/L EDTA）悬浮干粉，在涡流振荡器上混匀； ③加入50uL 10% SDS和2uL 20mg/mL的蛋白酶K，37℃温浴1h； ④加入75uL 5M/L NaCl和65uL CTAB/NaCl溶液，65℃温育20min； ⑤用等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提1次，10，000g离心10min，取上清液移至干净管中； ⑥将上清液，再加入等体积的氯仿：异戊醇（24：1）抽提1次； ⑦如水相与有机相之间仍有杂质，再重复抽提过程； ⑧上清液中加入0.6倍体积的异丙醇沉淀DNA（-20℃放置1-2h），10,000g离心10min； ⑨取沉淀，加70%乙醇洗1遍； ⑩真空干燥后将DNA溶解在TE缓冲液（10mM Tris-HCl,pH7.5; 0.1mMEDTA中，-70℃保存）。 |
3楼2012-03-10 07:43:41
uuu555000
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