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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教3'-RACE怎么扩增不到全长
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yuechuan86

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教3'-RACE怎么扩增不到全长

小弟，在做RACE扩增cDNA,5'已获得，根据测序结果设计引物,3‘-RACE扩增却得不到目标片段，要么扩增不出来，要么扩增出来的太小，目标700bp,扩出来只有300bp。望各位大虾多多指教哪！！！小弟感激不尽！！！
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1楼 2012-02-28 09:26:12
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那你就用半巢式或者降落pcr试试，因为3‘有polyA和3’UTR序列，很难预测3’的长度
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yuechuan86
4楼2012-02-29 11:45:36
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)
amisking(金币+5): 鼓励新虫发帖交流！ 2012-02-28 18:13:59
要用好的cdna一链和特异性好的引物
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yuechuan86
2楼2012-02-28 17:16:48
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yuechuan86

银虫 (初入文坛)
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引用回帖:
楼: Originally posted by hdfish860907 at 2012-02-28 17:16:48:
要用好的cdna一链和特异性好的引物

用的cDNA应该没问题，做其他的都可以扩出来，引物已经试了10个有余了，有的没有产物，有的很短。咋办呢？
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3楼2012-02-28 18:50:52
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yuechuan86

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by hdfish860907 at 2012-02-29 11:45:36:
那你就用半巢式或者降落pcr试试，因为3‘有polyA和3’UTR序列，很难预测3’的长度

这个倒是可以试试，谢谢指点哈
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5楼2012-02-29 15:56:12
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