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yuechuan86

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教3'-RACE怎么扩增不到全长

小弟,在做RACE扩增cDNA,5'已获得,根据测序结果设计引物,3‘-RACE扩增却得不到目标片段,要么扩增不出来,要么扩增出来的太小,目标700bp,扩出来只有300bp。望各位大虾多多指教哪!!!小弟感激不尽!!!
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

amisking(金币+5): 鼓励新虫发帖交流! 2012-02-28 18:13:59
要用好的cdna一链和特异性好的引物

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-02-28 17:16:48
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yuechuan86

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by hdfish860907 at 2012-02-28 17:16:48:
要用好的cdna一链和特异性好的引物

用的cDNA应该没问题,做其他的都可以扩出来,引物已经试了10个有余了,有的没有产物,有的很短。咋办呢?
3楼2012-02-28 18:50:52
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hdfish860907

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那你就用半巢式或者降落pcr试试,因为3‘有polyA和3’UTR序列,很难预测3’的长度

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-02-29 11:45:36
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yuechuan86

银虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by hdfish860907 at 2012-02-29 11:45:36:
那你就用半巢式或者降落pcr试试,因为3‘有polyA和3’UTR序列,很难预测3’的长度

这个倒是可以试试,谢谢指点哈
5楼2012-02-29 15:56:12
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