| 查看: 2262 | 回复: 2 | ||
thestormcong银虫 (小有名气)
|
[求助]
pkd46质粒转化
|
| 各位师兄师姐，我最近要做red基因敲除。现在在做第一步，将pkd46质粒转化入大肠杆菌中。通过化学转化，在AMP平板上长出大量转化子，通过挑单菌落到含有AMP的摇瓶，过夜后也有大量菌体，而将野生株菌接种至AMP摇瓶，则没有菌体生长。表明细菌里应该已经有质粒。但是几次提取质粒，都没有能够提取到，后来得知pkd46是低拷贝质粒，于是在提质粒时加大菌体量，得到一点点条带，几乎没有。不知道是怎么回事。是不是质粒真的就这么点，还是压根就没有转化成功。现在很是郁闷。后来干脆就对质粒用阿拉伯糖诱导，20mM，一个多小时诱导，也没有见条带与对照有差异。现在很是郁闷，麻烦各位师兄师姐提供点经验。。非常感谢!!! |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有135人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求pKD46和pCP20的质粒图谱
已经有7人回复
- 谁有用于大肠杆菌基因敲除的pKD46、pCP20等质粒
已经有7人回复
- 大肠杆菌基因重组时PKD46高温怎么都消除不了
已经有25人回复
- 9k表达质粒 电转化km71
已经有8人回复
- 酵母质粒转化及提取验证问题求助
已经有12人回复
- 啤酒酵母质粒转化求助
已经有7人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化质粒，出来的不是我要的了，怎么回事？
已经有13人回复
- 【求助/交流】质粒的转化体积为什么不能超过感受态的十分之一
已经有16人回复
- 【求助/交流】线性化质粒转化枯草方法
已经有7人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已经有11人回复
- 【求助/交流】诱导pkd46质粒表达不出目的蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】请教关于大肠杆菌lamda RED重组问题
已经有23人回复
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
2楼2012-02-27 09:54:16
thestormcong
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 462.1
- 红花: 3
- 帖子: 103
- 在线: 109.2小时
- 虫号: 1410070
- 注册: 2011-09-20
- 专业: 生物化学
3楼2012-02-27 16:36:42
