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thestormcong银虫 (小有名气)
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pkd46质粒转化
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| 各位师兄师姐，我最近要做red基因敲除。现在在做第一步，将pkd46质粒转化入大肠杆菌中。通过化学转化，在AMP平板上长出大量转化子，通过挑单菌落到含有AMP的摇瓶，过夜后也有大量菌体，而将野生株菌接种至AMP摇瓶，则没有菌体生长。表明细菌里应该已经有质粒。但是几次提取质粒，都没有能够提取到，后来得知pkd46是低拷贝质粒，于是在提质粒时加大菌体量，得到一点点条带，几乎没有。不知道是怎么回事。是不是质粒真的就这么点，还是压根就没有转化成功。现在很是郁闷。后来干脆就对质粒用阿拉伯糖诱导，20mM，一个多小时诱导，也没有见条带与对照有差异。现在很是郁闷，麻烦各位师兄师姐提供点经验。。非常感谢!!! |
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