应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么最近做连接转化总是失败
212/3返回列表上一页123下一页
查看: 4486  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

dappxiaomm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接时间太短了吧，我们一般连接过夜的。还有可能是你用的感受态不行哦。你可以做个对照，找出原因。
赞一下 回复此楼
11楼2012-02-25 18:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoeye

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3, MolEPI+1): 很有用哦 2012-02-27 10:50:18
1、可以先用感受态转质粒看看 检查下是不是感受态的问题
2、新倒一批板 排除板的问题
3、连接比例 如果我没记错的话 应该是
（载体用量 如：100ng）/载体碱基数：T载大小）/（片段用量/片段碱基数600bp)=1:3 这个公式算一下（应该是的 建议你查一下 我经常会把两个比例记反）
4、你应该是用Taq酶P的吧 不是的话记得要加A~~~
5、连接时间 我一般都是4°过夜的 如果楼主不急 就延长一下连接时间吧
6、多转一点吧 虽然我也是转的10微升 你就转20好了
TaKaRa的pMD18-T Vector我一直在用 觉得很好用 很好构的
建议楼主在连接的时候可以把载体片段的量多做几管 不同比例 然后分别转化 看看会不会好一点
希望对你有帮助
赞一下(2人) 回复此楼
12楼2012-02-26 01:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li-spring

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也连续做了六次 感觉都没有连接上，转化细菌长的很慢 48小时才长出来
赞一下 回复此楼
13楼2012-02-26 10:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-27 10:50:45
这个原因我还真晓得，我遇见过，本人觉得首先是你回收的片段太小，还有再加上另外一种可能回收条带亮度不太行，接着用快连时间太短，导致效率不是很好，建议，回收片段亮度要提高，其次可以用慢连，放在室温16度，过夜，然后明天会出现很多单菌落（前提是体系要对）。
要多给点金币啊
赞一下 回复此楼
体会生活
14楼2012-02-27 00:16:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by dappxiaomm at 2012-02-25 18:07:32:
连接时间太短了吧，我们一般连接过夜的。还有可能是你用的感受态不行哦。你可以做个对照，找出原因。

我们实验室一直都是16°C连1h的，几乎都没问题，时间太长会不会导致很多自连啊？
赞一下 回复此楼
15楼2012-02-27 10:54:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zoeye at 2012-02-26 01:05:39:
1、可以先用感受态转质粒看看 检查下是不是感受态的问题
2、新倒一批板 排除板的问题
3、连接比例 如果我没记错的话 应该是
（载体用量 如：100ng）/载体碱基数：T载大小）/（片段用量/片段碱基数600bp)=1:3  ...

谢谢你的建议，我试试吧
赞一下 回复此楼
16楼2012-02-27 10:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zhongmianhua at 2012-02-27 00:16:40:
这个原因我还真晓得，我遇见过，本人觉得首先是你回收的片段太小，还有再加上另外一种可能回收条带亮度不太行，接着用快连时间太短，导致效率不是很好，建议，回收片段亮度要提高，其次可以用慢连，放在室温16度， ...

我以前回收过250bp的片段，然后连接转化也做出来了。那怎样提高回收片段的亮度？我的金币不多了呀，呵呵~~
赞一下 回复此楼
17楼2012-02-27 10:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by li-spring at 2012-02-26 10:06:41:
我也连续做了六次 感觉都没有连接上，转化细菌长的很慢 48小时才长出来

好痛苦啊，做分子的孩纸伤不起呀~~
赞一下 回复此楼
18楼2012-02-27 11:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-27 13:36:55
一、16度过夜大概十来个小时，一个小时效果很差 的。
二、感受态细胞最好买公司分装好的。
三、10微升体系已经足够了。
四、切胶回收的时候，测一下浓度，一般70~100ng/微升,浓度太低，也不行。也可以跑一块琼脂糖看看回收效果。
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
19楼2012-02-27 11:42:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

艰苦温度

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by zoeye at 2012-02-26 01:05:39
1、可以先用感受态转质粒看看 检查下是不是感受态的问题
2、新倒一批板 排除板的问题
3、连接比例 如果我没记错的话 应该是
（载体用量 如：100ng）/载体碱基数：T载大小）/（片段用量/片段碱基数600bp)=1:3 这 ...

请问加A是什么意思啊？
赞一下 回复此楼
20楼2014-01-09 13:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nan_nan_2012 的主题更新
212/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 4/200 2026-08-01 21:13 by Kddn1pB6pAzX
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 4/200 2026-08-01 21:11 by Kddn1pB6pAzX
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 4/200 2026-08-01 21:11 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 4/200 2026-08-01 21:10 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 8/400 2026-08-01 20:57 by Kddn1pB6pAzX
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 9/450 2026-08-01 20:43 by Kddn1pB6pAzX
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-08-01 10/500 2026-08-01 20:42 by Kddn1pB6pAzX
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 12/600 2026-08-01 20:33 by Kddn1pB6pAzX
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 11/550 2026-08-01 20:33 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 12/600 2026-08-01 20:30 by Kddn1pB6pAzX
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 9/450 2026-08-01 20:11 by Kddn1pB6pAzX
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 jzg3xk1po8 2026-07-31 11/550 2026-08-01 20:03 by Kddn1pB6pAzX
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jzg3xk1po8 2026-07-31 13/650 2026-08-01 20:02 by Kddn1pB6pAzX
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 8/400 2026-08-01 18:22 by Kddn1pB6pAzX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 9zw1gfyi7x 2026-07-31 11/550 2026-08-01 18:17 by Kddn1pB6pAzX
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭