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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么最近做连接转化总是失败
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么最近做连接转化总是失败

本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做连接转化，感受态用过自己做的和别人做的都不长菌落，也用过买的感受态，只长了不到10个菌落挑单克隆后做菌液PCR检测发现都是空载，请问是什么原因？请各位高手指教一下！！谢啦！（我的回收产物大小在600~700bp之间，回收产物4ul，载体1ul，SolutionI 5ul，16°C连接1h）
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1楼 2012-02-24 13:36:21
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zoeye at 2012-02-26 01:05:39:
1、可以先用感受态转质粒看看 检查下是不是感受态的问题
2、新倒一批板 排除板的问题
3、连接比例 如果我没记错的话 应该是
（载体用量 如：100ng）/载体碱基数：T载大小）/（片段用量/片段碱基数600bp)=1:3  ...

谢谢你的建议，我试试吧
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16楼2012-02-27 10:56:00
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angie8610

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是氨苄过量了。。。。。。
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新手上路，多多关照！
2楼2012-02-24 14:58:03
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by angie8610 at 2012-02-24 14:58:03:
会不会是氨苄过量了。。。。。。

100ml的LB固体培养基我加了110ul的氨苄，不会太多吧
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3楼2012-02-24 18:53:13
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wuxmxjtu

禁虫 (初入文坛)
wanhscn(金币+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置顶 2012-02-25 19:20:18
本帖内容被屏蔽
4楼2012-02-24 20:22:24
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