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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么最近做连接转化总是失败
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么最近做连接转化总是失败

本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做连接转化，感受态用过自己做的和别人做的都不长菌落，也用过买的感受态，只长了不到10个菌落挑单克隆后做菌液PCR检测发现都是空载，请问是什么原因？请各位高手指教一下！！谢啦！（我的回收产物大小在600~700bp之间，回收产物4ul，载体1ul，SolutionI 5ul，16°C连接1h）
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1楼 2012-02-24 13:36:21
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-27 13:36:55
一、16度过夜大概十来个小时，一个小时效果很差 的。
二、感受态细胞最好买公司分装好的。
三、10微升体系已经足够了。
四、切胶回收的时候，测一下浓度，一般70~100ng/微升,浓度太低，也不行。也可以跑一块琼脂糖看看回收效果。
赞一下 回复此楼
总有一天我要修改用户名。
19楼2012-02-27 11:42:22
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angie8610

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是氨苄过量了。。。。。。
赞一下 回复此楼
新手上路，多多关照！
2楼2012-02-24 14:58:03
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by angie8610 at 2012-02-24 14:58:03:
会不会是氨苄过量了。。。。。。

100ml的LB固体培养基我加了110ul的氨苄，不会太多吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-24 18:53:13
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wuxmxjtu

禁虫 (初入文坛)
wanhscn(金币+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置顶 2012-02-25 19:20:18
本帖内容被屏蔽
4楼2012-02-24 20:22:24
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