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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 5.5
帖子: 16
在线: 7.3小时
虫号: 1637341
注册: 2012-02-23
专业: 细胞增殖、生长与分化

[求助] 为什么最近做连接转化总是失败

本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做连接转化，感受态用过自己做的和别人做的都不长菌落，也用过买的感受态，只长了不到10个菌落挑单克隆后做菌液PCR检测发现都是空载，请问是什么原因？请各位高手指教一下！！谢啦！（我的回收产物大小在600~700bp之间，回收产物4ul，载体1ul，SolutionI 5ul，16°C连接1h）

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1楼 2012-02-24 13:36:21

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dappxiaomm

金虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 440.4
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帖子: 164
在线: 47.2小时
虫号: 1461356
注册: 2011-10-26
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

连接时间太短了吧，我们一般连接过夜的。还有可能是你用的感受态不行哦。你可以做个对照，找出原因。

11楼2012-02-25 18:07:32

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angie8610

铁虫 (小有名气)

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虫号: 1289033
注册: 2011-05-08
性别: MM
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

会不会是氨苄过量了。。。。。。

新手上路，多多关照！

2楼2012-02-24 14:58:03

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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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专业: 细胞增殖、生长与分化

引用回帖:

楼: Originally posted by angie8610 at 2012-02-24 14:58:03:
会不会是氨苄过量了。。。。。。

100ml的LB固体培养基我加了110ul的氨苄，不会太多吧

3楼2012-02-24 18:53:13

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wuxmxjtu

禁虫 (初入文坛)

wanhscn(金币+2): 有道理！ 2012-02-25 15:53:05
西瓜: 回帖置顶 2012-02-25 19:20:18

本帖内容被屏蔽

4楼2012-02-24 20:22:24

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