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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么最近做连接转化总是失败
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nan_nan_2012

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么最近做连接转化总是失败

本人最近用TaKaRa的pMD18-T Vector做连接转化，感受态用过自己做的和别人做的都不长菌落，也用过买的感受态，只长了不到10个菌落挑单克隆后做菌液PCR检测发现都是空载，请问是什么原因？请各位高手指教一下！！谢啦！（我的回收产物大小在600~700bp之间，回收产物4ul，载体1ul，SolutionI 5ul，16°C连接1h）
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1楼 2012-02-24 13:36:21
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eagle00768

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用invitrogen 的pENTR载体试试，那个转化效率挺高的
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5楼2012-02-25 13:07:11
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eagle00768

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by nan_nan_2012 at 2012-02-25 16:43:44:
TaKaRa的pMD18-T Vector转化效率应该也可以啊，以前一直用这个的，没有出现这种情况，是不是回收的片段有问题啊会影响连接？

同意楼上几位所说的，转个空载体做个对照，同时转，看是不是真的连上了。如果没连上的话，建议换个载体吧。不过用pENTR的话正向引物前面要再加CACC，PCR产物是平末端的
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9楼2012-02-25 16:55:55
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eagle00768

木虫 (小有名气)
wanhscn(金币+5): 应助很踊跃，5金币奖励 2012-02-25 17:18:50
西瓜(金币+2): 鼓励热心应助 2012-02-25 19:22:50
引用回帖:
8楼: Originally posted by nan_nan_2012 at 2012-02-25 16:43:44:
TaKaRa的pMD18-T Vector转化效率应该也可以啊，以前一直用这个的，没有出现这种情况，是不是回收的片段有问题啊会影响连接？

回收的片段不大阿，应该不会有什么问题
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10楼2012-02-25 16:57:43
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