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joyjane88铜虫 (初入文坛)
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[求助]
大肠杆菌超声破碎参数，求解！！！
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| 各位虫友，小弟刚刚学做纯化蛋白。诱导表达后在超声破碎，总是无活性不溶性的蛋白，师兄说应该是破碎出了问题。看到大家谈破碎功率啊，探头啊，参数啊什么的，无一定论，各有各的高招。迷茫了。想具体问一下破碎1ml（可溶性表达检测）和30ml（大规模诱导纯化）重悬菌液分别选用什么型号探头，什么功率，什么参数比较合适？目前只有一个6号探头，一个6号探头是否都可以应付？谢谢 |
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 蛋白质表达 |
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alarace
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2012-02-16 12:51:49
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2012-02-16 12:51:49
| 不同的变幅杆可适用于不同量的重悬液，所以只有一个变幅杆肯定不能解决问题（1ml和30ml），超声破碎掌握一个基本的原则就是每次超声保证菌液不过热就可以。下面是一家超声破碎仪变幅杆的参数（仅供参考，非广告贴）http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102081/Q1202165.htm |
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joyjane884楼2012-02-16 10:39:27
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
joyjane88(金币+5): ★★★★★最佳答案 非常感谢，这几天忙点别的没有及时回复。另外，25W是不是太低了，我又试过1.5ml重悬菌液，6号探头，80W，绝不止10分钟，镜检和离心后都能看到还有没有破碎的菌体细胞。 2012-02-21 22:56:01
joyjane88(金币+5): ★★★★★最佳答案 非常感谢，这几天忙点别的没有及时回复。另外，25W是不是太低了，我又试过1.5ml重悬菌液，6号探头，80W，绝不止10分钟，镜检和离心后都能看到还有没有破碎的菌体细胞。 2012-02-21 22:56:01
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1. 6号探头都可以，但是注意1 ml菌液的话要保证探头插入液面而且不要触底。 2. 超声破碎1 ml菌液用25瓦的功率，5s on, 5s off，超声3-5分钟差不多就看到菌液澄清了。但是时间和你菌液浓度也有关系，建议浓度不要过高。 超声破碎30 ml菌液用25瓦的功率，10s on, 10s off，超声10-15分钟差不多就看到菌液澄清了。 3. 超声前最好加入蛋白酶抑制剂PMSF，以防止目的蛋白的降解。 4. 超声要在低温环境下进行，因为超声时会发热，不在低温下容易让蛋白质变性失去活性，出现沉淀。（这个温度问题你一定要注意）保持低温环境的常用经济方法是：将装有菌液的管子放在装有冰的烧杯里，然后一起放超声仪里超声。时间久的话及时更换冰。 |
7楼2012-02-17 10:54:15
joyjane88
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8楼2012-02-21 22:58:28
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