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若水5886

新虫 (小有名气)

如果你1.5 ml用80w的超声10分钟还不澄清的话,我考虑你是不是没有加triton-x100或者溶菌酶呀?我们做的时候都加0.1%左右的triton,可以有效破碎细胞的。还有菌液浓度不要高,浓度高的话即使你的菌液体积小,也不容易超声完全的
11楼2012-02-22 09:45:20
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wind20020108

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by joyjane88 at 2012-02-21 23:05:15:
谢谢,有人说超声功率及次数太高可能会导致蛋白变性而变得不可溶,有道理吗?我制备的上清目的条带大小处有条弱带,不知道是不是目的蛋白。其他杂带很多,个人也觉得既然杂蛋白没有变性,目的蛋白也不至于吧。

你太过纠结于超声和可溶性表达了,如果可溶性蛋白少,可以做大瓶表达,做4L后纯化,得到的蛋白量会不少。要不你再降低温度,16-22度都可以。我认为,蛋白的可溶性是和蛋白是否正确折叠有关,和超声关系很小。
不知道能说啥
12楼2012-02-22 20:39:17
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

超声波破碎的可能性不大吧,这个
总有一天我要修改用户名。
13楼2012-02-22 22:27:11
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fang-1

新虫 (初入文坛)

因为形成了包涵体,建议lz变性后纯化蛋白,再复性
14楼2012-02-24 16:04:26
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xxd429 at 2012-02-15 16:52:23
大肠杆菌表达的过程中由于有可能形成包涵体,所以可能表达的蛋白无活性。你可以在这方面考虑一下,不一定是破碎的问题。

我破碎后上清活性高低,但是沉淀中活性很高,这是形成包涵体还是没有破开啊?
nothing isimpossible
15楼2013-05-14 23:24:06
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bbbzd1

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by alarace at 2012-02-16 10:39:27
不同的变幅杆可适用于不同量的重悬液,所以只有一个变幅杆肯定不能解决问题(1ml和30ml),超声破碎掌握一个基本的原则就是每次超声保证菌液不过热就可以。下面是一家超声破碎仪变幅杆的参数(仅供参考,非广告贴) ...

只要探头型号一定,是不是所有厂家,都是一个规格的呀
挺好!就做个虫虫吧!
16楼2014-03-29 21:22:08
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