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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 大肠杆菌超声破碎参数，求解！！！
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joyjane88

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌超声破碎参数，求解！！！

各位虫友，小弟刚刚学做纯化蛋白。诱导表达后在超声破碎，总是无活性不溶性的蛋白，师兄说应该是破碎出了问题。看到大家谈破碎功率啊，探头啊，参数啊什么的，无一定论，各有各的高招。迷茫了。想具体问一下破碎1ml（可溶性表达检测）和30ml（大规模诱导纯化）重悬菌液分别选用什么型号探头，什么功率，什么参数比较合适？目前只有一个6号探头，一个6号探头是否都可以应付？谢谢
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1楼2012-02-15 09:33:34
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wind20020108

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我说的50毫升是指一升菌液离心下来50毫升PBS重悬
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不知道能说啥
6楼2012-02-16 21:41:30
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joyjane88

铜虫 (初入文坛)
刚刚又看网上有说可以根据成熟的破碎条件的参数换算不同体积/功率/工作时间/破碎次数的参数：（工作时间*功率*破碎次数）/菌液体积=N(定值)。照这个方法是不是基本可行呢？望指点
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2楼2012-02-15 09:57:02
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xxd429

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励回答 2012-02-15 17:40:43
大肠杆菌表达的过程中由于有可能形成包涵体，所以可能表达的蛋白无活性。你可以在这方面考虑一下，不一定是破碎的问题。
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充电
3楼2012-02-15 16:52:23
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2012-02-16 12:51:49
不同的变幅杆可适用于不同量的重悬液，所以只有一个变幅杆肯定不能解决问题（1ml和30ml），超声破碎掌握一个基本的原则就是每次超声保证菌液不过热就可以。下面是一家超声破碎仪变幅杆的参数（仅供参考，非广告贴）http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102081/Q1202165.htm
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joyjane88
4楼2012-02-16 10:39:27
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