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joyjane88

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌超声破碎参数,求解!!!

各位虫友,小弟刚刚学做纯化蛋白。诱导表达后在超声破碎,总是无活性不溶性的蛋白,师兄说应该是破碎出了问题。看到大家谈破碎功率啊,探头啊,参数啊什么的,无一定论,各有各的高招。迷茫了。想具体问一下破碎1ml(可溶性表达检测)和30ml(大规模诱导纯化)重悬菌液分别选用什么型号探头,什么功率,什么参数比较合适?目前只有一个6号探头,一个6号探头是否都可以应付?谢谢
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joyjane88

铜虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by wind20020108 at 2012-02-16 21:24:12:
6号探头破碎50毫升没问题的,可以设置3秒 3秒 20分钟,我个人感觉蛋白不溶和超声没问题吧,另外 我也用6号探头超过3毫升,没问题。注意蛋白冷却即可

谢谢,有人说超声功率及次数太高可能会导致蛋白变性而变得不可溶,有道理吗?我制备的上清目的条带大小处有条弱带,不知道是不是目的蛋白。其他杂带很多,个人也觉得既然杂蛋白没有变性,目的蛋白也不至于吧。
10楼2012-02-21 23:05:15
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joyjane88

铜虫 (初入文坛)

刚刚又看网上有说可以根据成熟的破碎条件的参数换算不同体积/功率/工作时间/破碎次数的参数:(工作时间*功率*破碎次数)/菌液体积=N(定值)。照这个方法是不是基本可行呢?望指点
2楼2012-02-15 09:57:02
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xxd429

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看天(金币+3): 鼓励回答 2012-02-15 17:40:43
大肠杆菌表达的过程中由于有可能形成包涵体,所以可能表达的蛋白无活性。你可以在这方面考虑一下,不一定是破碎的问题。
充电
3楼2012-02-15 16:52:23
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
silicare(金币+3, BioEPI+1): 谢谢参与 2012-02-16 12:51:49
不同的变幅杆可适用于不同量的重悬液,所以只有一个变幅杆肯定不能解决问题(1ml和30ml),超声破碎掌握一个基本的原则就是每次超声保证菌液不过热就可以。下面是一家超声破碎仪变幅杆的参数(仅供参考,非广告贴)http://www.instrument.com.cn/netshow/SH102081/Q1202165.htm

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4楼2012-02-16 10:39:27
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