应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 组氨酸标记蛋白的纯化
71/1返回列表
查看: 2339  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

cherrysyp

新虫 (初入文坛)

[求助] 组氨酸标记蛋白的纯化

各位大侠，真心求助啊！
我现在要做表达载体的构建，发现选的载体并没有6个组氨酸的标记，那我在后面应该怎么纯化呢，或者说有什么办法可以把6×His-tag加进去吗？
真心感谢好心人给出建议，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-13 20:47:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xxtlxx

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

小丹木木(金币+5): good！辛苦了！情人节快乐！ 2012-02-14 10:38:51
小丹木木(MolEPI+1): 2012-02-14 10:39:34
没有看懂你的意图，请按以下分类对号入座：
1. 目的只是获取带his-tag的通用表达载体，目前商业化成熟的载体有很多，比如novagen的pet系列。
2. 目的是构建特殊的（不同宿主，特殊标记等等）带his-tag的表达载体，手中有类似pet22b之类的商业化质粒，可以从商业质粒上连mcs带his-tag甚至带promoter,terminator一起构建进你的目标载体。
3. 目的是构建特殊的（不同宿主，特殊标记等等）带his-tag的表达载体，手中无类似pet22b之类的商业化质粒，可以利用pcr方法在引物中带入HIS*6的碱基导入你的载体。
4. 只是要在该载体中表达带his-tag的基因，简单地在pcr扩增基因片段时候在引物中设计进6个his编码碱基，N端C端取决于你的蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

cherrysyp
2楼2012-02-14 06:33:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(专家考核): 情人节快乐！ 2012-02-14 10:40:17
载体并没有6His-tag的话，设计引物，其中一个引物含编码6His-tag的序列，PCR后克隆到你的载体，就让你的蛋白带6His-tag了。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

cherrysyp
3楼2012-02-14 07:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherrysyp

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-14 07:51:49:
载体并没有6His-tag的话，设计引物，其中一个引物含编码6His-tag的序列，PCR后克隆到你的载体，就让你的蛋白带6His-tag了。

非常感谢您的回帖，可以给我个联系方式，进一步交流下吗，感谢啊。。。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-15 21:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cherrysyp

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xxtlxx at 2012-02-14 06:33:56:
没有看懂你的意图，请按以下分类对号入座：
1. 目的只是获取带his-tag的通用表达载体，目前商业化成熟的载体有很多，比如novagen的pet系列。
2. 目的是构建特殊的（不同宿主，特殊标记等等）带his-tag的表达载体 ...

首先很感谢您这么辛苦的回复。是我自己没有表达清楚。。。
是这样的，我现在有商业化的表达载体，但是载体上没有his-tag标签，这样的话我就想到了后面纯化很麻烦，您的意思是不是我可以在合成引物的时候自己加上His-tag啊？那后面就可以用成熟的纯化方法了，是吗？
您可以留个联系方式吗，请教您一下。。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-16 21:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangwq

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-17 13:43:07
PCR加组氨酸太麻烦，重新找个自带N-, 或C-，或两端都带6HIS的载体，重新酶切连接进去就好了。应该不麻烦，最多2-4天就搞定。
赞一下 回复此楼
6楼2012-02-16 21:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用PCR方法导入很简单。直接早引物中加上6-8个HIS就OK了。一般在C端！
赞一下 回复此楼
7楼2012-02-17 11:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cherrysyp 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +5 炎黄贵胄 2026-08-22 6/300 2026-08-24 06:34 by sincosx
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭