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[求助]
组氨酸标记蛋白的纯化
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各位大侠，真心求助啊！ 我现在要做表达载体的构建，发现选的载体并没有6个组氨酸的标记，那我在后面应该怎么纯化呢，或者说有什么办法可以把6×His-tag加进去吗？ 真心感谢好心人给出建议，谢谢！ |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
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cherrysyp3楼2012-02-14 07:51:49
【答案】应助回帖
小丹木木(金币+5): good！辛苦了！情人节快乐！ 2012-02-14 10:38:51
小丹木木(MolEPI+1): 2012-02-14 10:39:34
小丹木木(MolEPI+1): 2012-02-14 10:39:34
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没有看懂你的意图，请按以下分类对号入座： 1. 目的只是获取带his-tag的通用表达载体，目前商业化成熟的载体有很多，比如novagen的pet系列。 2. 目的是构建特殊的（不同宿主，特殊标记等等）带his-tag的表达载体，手中有类似pet22b之类的商业化质粒，可以从商业质粒上连mcs带his-tag甚至带promoter,terminator一起构建进你的目标载体。 3. 目的是构建特殊的（不同宿主，特殊标记等等）带his-tag的表达载体，手中无类似pet22b之类的商业化质粒，可以利用pcr方法在引物中带入HIS*6的碱基导入你的载体。 4. 只是要在该载体中表达带his-tag的基因，简单地在pcr扩增基因片段时候在引物中设计进6个his编码碱基，N端C端取决于你的蛋白。 |
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2楼2012-02-14 06:33:56
4楼2012-02-15 21:42:18
5楼2012-02-16 21:07:10