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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌转化问题
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铅钋锶钇

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌转化问题

目的基因与载体双酶切连接后，进行大肠杆菌转化时，除了重组DNA的连接转化外，还必须要做的对照有哪两个。为什么
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1楼 2012-02-13 10:38:09
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 是可以加一个空载哦， 2012-02-14 10:30:54
铅钋锶钇(金币+2): 2012-02-18 10:51:17
我觉得，至少要做一个酶切载体不加目的基因进行链接的转化作为对照吧。如果这个不加目的基因的对照组不长点或者长的很少，证明你的载体酶切没有问题，而且你加目的基因的连接产物应该是含有你的目的基因而不是载体自连。这个对照组也能说明你的感受态和平板没有问题。
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3楼2012-02-13 12:52:26
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good！ 2012-02-14 16:20:15
铅钋锶钇(金币+2): 2012-02-18 10:51:09
阴性对照：直接用感受态涂板，验证平板抗性是否有效（没长菌落，正    常； 长了菌落，平板失效）
阳性对照：用感受态和一个抗性相同的已知的质粒，验证感受态是否有效（长了较多菌落，正常； 没长菌落，感受态有问题）
大概就这样了
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2楼2012-02-13 10:49:09
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-02-14 16:20:55
铅钋锶钇(金币+2): 2012-02-18 10:51:24
一个空载体不带目的片段作对照
一个载体带目的片段
转入大肠杆菌
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4楼2012-02-13 20:22:34
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2012-02-14 16:21:09
铅钋锶钇(金币+2): 2012-02-18 10:51:33
一个空载体作对照，转化后不量涂板，如果长了很多，说明感受态没有问量。另一个就是用双酶切后的载体当作质粒转化，如果也能长菌斑，说明酶切不够彻底，有载体自连
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5楼2012-02-14 14:21:03
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