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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验问题
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188283828

金虫 (小有名气)

[交流] 介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验问题

如题，在做介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验上遇到了几个问题：
1，纳米粒聚集现象比较严重，是否有较好的解决方法？
2，纳米粒无法进入细胞，推测是聚集现象导致的或者是因为孵育的时间不够长？（因此想问问做过的人士，孵育多久合适？）
3，结果看上去纳米粒并没有进入细胞，但是却没被PBS洗掉，请教各位大牛如何彻底地清洗残留在细胞膜上的纳米粒。

不知道清不清楚，大概就是这样的。。




[ Last edited by 188283828 on 2012-2-11 at 21:57 ]
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1楼 2012-02-11 13:54:06
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keven7928

至尊木虫 (知名作家)
★
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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-14 15:45:25
一般孵育4h就足够了
不知道你合成的介孔硅胶纳米粒是参考那个文献作的？
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8楼2012-02-13 12:42:15
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普通回帖

liuanan

专家顾问 (著名写手)
★
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lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-12 16:06:38
表面修饰做了吗？水溶性咋样？
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2楼2012-02-11 14:35:49
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuanan at 2012-02-11 14:35:49:
表面修饰做了吗？水溶性咋样？

做了氨基的修饰，水溶性较之前没有明显的变化。

但是纵观我做的所有的处方，水溶性都不是很好，只有个别的呈现分散的很好的状态。（我想您所说的水溶性是指分散性吧？毕竟硅胶也没法溶解在水里）
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3楼2012-02-11 16:10:39
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)
★
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188283828(金币+5): 很多思想就是我正在做的...非常感谢 2012-02-11 21:53:36
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-11 22:51:08
我觉得你的这个不能说在细胞膜上  或者说 没有进入细胞   

蓝色细胞核纳米粒子一般式进入不了的  细胞核周围的还是有绿色的 反而可以说明可能进入细胞

你细胞的浓度太高，做这个细胞浓度低比较好，最好一个视野只有几个，细胞不要聚集，这样在白光视野下你可以方便看出细胞的边界。也就是说可以还叠加一个白光的视野。

孵育的时间 一般也不用太长，24小时差不多。

从你的图片上看，不能确定纳米粒子就聚集在细胞膜上，不要纠结纳米粒子吸附在细胞膜上，你用激光共聚焦，只有在一个平面上的光信号才可以进入检测器，实际相当于在细胞中间进行切片，你可以参考下标记细胞膜的染料，这样的染料在激光共聚焦显微镜下，就是细胞膜一圈。

稀释下细胞浓度，在做一次，就可以得到你想要的图片了。
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4楼2012-02-11 19:32:38
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huquan0_0 at 2012-02-11 19:32:38:
我觉得你的这个不能说在细胞膜上  或者说 没有进入细胞   

蓝色细胞核纳米粒子一般式进入不了的  细胞核周围的还是有绿色的 反而可以说明可能进入细胞

你细胞的浓度太高，做这个细胞浓度低比较好，最好一个 ...


首先,非常感谢您的回帖,您的意见很中肯.
您说的很对,细胞核是肯定进不去的...
并且下次做的时候我会考虑降低细胞浓度的...
关于孵育的时间,我帖子的图是在孵育两个小时的情况下做的,我这次孵育两天试试看,如果时间过长我会考虑用您提到的24h...

另外您说的激光共聚焦相当于一个细胞进行切片那个理论我有点疑问,光路怎么会切片进入呢?如果吸附在细胞膜上方的纳米粒,照下来在一个平面上,看上去会不会就像是在细胞内了呢??不过我已经用细胞膜染料染了,马上准备再做了...

再次感谢您的回帖..
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5楼2012-02-11 22:02:31
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
★
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mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-14 15:45:12
表面PEG修饰了吗？表面亲水官能团太小和太少都不足以使其水分散良好。
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6楼2012-02-13 10:51:27
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liuanan at 2012-02-13 10:51:27:
表面PEG修饰了吗？表面亲水官能团太小和太少都不足以使其水分散良好。

谢谢你的回复，这两天就在做PEG修饰
之前也修饰过亲水基团，但是对分散性没有改进
请问您是否做过类似实验？我目前来说分散性好坏都是根据处方不同，直接得到的，也整理不出什么影响因素，很囧，而且处方重现性也不是很好。
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7楼2012-02-13 11:08:28
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
★ ★
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188283828(金币+2): 谢谢您的热心交流，对我有一定的启发性 2012-02-13 14:45:08
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-05-24 08:05:00
关于修饰是否好坏的问题，这是nanomedicine难以临床应用的重大障碍，是技术问题。每次修饰都是不一样的。修饰的好坏可以通过离心是否沉淀来判断。例如4000rpm，10min。有时候会把沉淀抛弃，使用上清中残留的纳米粒子。
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9楼2012-02-13 12:57:26
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by keven7928 at 2012-02-13 12:42:15:
一般孵育4h就足够了
不知道你合成的介孔硅胶纳米粒是参考那个文献作的？

谢谢你的回复

孵育的时间很多文献报道各不相同，
有的甚至做了对比实验，但是出于细胞吞噬能力的不同，以及纳米粒大小的不同
孵育时间从2h-48h不等。
我没试过别的时间，后续可能会做一组对比实验。
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10楼2012-02-13 12:57:39
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bioc

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
mwyuer(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-14 15:47:01
你可以做confocal的Z轴切向扫描看看
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11楼2012-02-13 13:51:02
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liuanan at 2012-02-13 12:57:26:
关于修饰是否好坏的问题，这是nanomedicine难以临床应用的重大障碍，是技术问题。每次修饰都是不一样的。修饰的好坏可以通过离心是否沉淀来判断。例如4000rpm，10min。有时候会把沉淀抛弃，使用上清中残留的纳米粒 ...

谢谢您的回复，
如果方便的话可以加我QQ，我们也可以探讨探讨。

我目前还是有一些进展的，只是想要进一步得到更好的结果就还是遇到一些困难
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12楼2012-02-13 14:39:01
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by bioc at 2012-02-13 13:51:02:
你可以做confocal的Z轴切向扫描看看

谢谢您的回复，
我这次做的时候就会做Z轴切向扫描了，不过上面贴出来的图从我个人感觉上来说是确实没进到细胞的，毕竟离染出来的细胞核的距离都太远了。
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13楼2012-02-13 14:40:14
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
建议你了解一下confocal的成像原理
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14楼2012-02-13 14:49:20
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by liuanan at 2012-02-13 14:49:20:
建议你了解一下confocal的成像原理

没懂你什么意思，你是说关于切面成像？但是那个只是光学意义上的横断面。
细胞外如果粘附纳米粒是会影响所成的像的。。。
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15楼2012-02-13 16:44:52
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江南的竹

主管区长 (文学泰斗)
★
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…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
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16楼2012-02-13 16:51:16
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 江南的竹 at 2012-02-13 16:51:16:
…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………

有什么可以指点一下的？
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17楼2012-02-13 17:06:18
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eraserer

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-05-24 08:05:43
我感觉肯定是有纳米粒子进入细胞了，至于团聚的问题 我感觉在加入纳米粒子之前可以超声分散的 一定尽量超声 再有就是在被细胞吞噬后 不可避免有团聚现象 如果每个纳米粒子都单个分散 你也很难从CLSM中观察到纳米粒子的荧光 换句话说就是一定程度的团聚会使得荧光更明显 关于洗不干净游离纳米粒子的问题  我也遇到过 但是一般不都是洗三遍 固定 再洗三遍吗 应该把大部分洗掉 有点游离的也没问题 据我的经验 2小时基本纳米粒子肯定被吞噬了
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23楼2012-02-19 09:20:03
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wanlong

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
mwyuer: 金币+1, 感谢回帖交流 2012-05-24 08:05:57
楼主你好，我看你的confocal感觉已经摄取了，你再做个细胞膜染色，效果应该不错。你的荧光素是共价接到硅胶上的还是就是普通吸附？
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24楼2012-05-21 16:30:52
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by wanlong at 2012-05-21 16:30:52:
楼主你好，我看你的confocal感觉已经摄取了，你再做个细胞膜染色，效果应该不错。你的荧光素是共价接到硅胶上的还是就是普通吸附？

你好，我的问题已经解决了
是共价结合的
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25楼2012-05-24 02:25:58
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EbbE820

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
25楼: Originally posted by 188283828 at 2012-05-24 02:25:58
你好，我的问题已经解决了
是共价结合的...

楼主，你好，想请教你用什么材料对细胞膜染色的，谢谢
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26楼2012-09-13 21:45:26
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wanlong

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by EbbE820 at 2012-09-13 21:45:26
楼主，你好，想请教你用什么材料对细胞膜染色的，谢谢...

可用罗丹明鬼笔环肽进行细胞膜染色
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27楼2013-01-25 11:03:20
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zhangkun232

至尊木虫 (著名写手)
??!
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28楼2013-10-10 22:42:18
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管天道道

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DecodeDateTime(TimeStart, Year, Month, Day, Hour, Min, Sec, MSec);
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29楼2013-10-11 01:13:18
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清爽一派

金虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问下你的介孔硅材料使用什么试剂染得荧光？
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30楼2016-03-25 14:16:40
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sirodeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问问题解决了么？我的纳晶也是这个问题。。。
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31楼2021-04-20 10:40:18
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