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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验问题
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188283828

金虫 (小有名气)

[交流] 介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验问题

如题，在做介孔硅胶纳米粒的激光共聚焦实验上遇到了几个问题：
1，纳米粒聚集现象比较严重，是否有较好的解决方法？
2，纳米粒无法进入细胞，推测是聚集现象导致的或者是因为孵育的时间不够长？（因此想问问做过的人士，孵育多久合适？）
3，结果看上去纳米粒并没有进入细胞，但是却没被PBS洗掉，请教各位大牛如何彻底地清洗残留在细胞膜上的纳米粒。

不知道清不清楚，大概就是这样的。。




[ Last edited by 188283828 on 2012-2-11 at 21:57 ]
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1楼 2012-02-11 13:54:06
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huquan0_0 at 2012-02-11 19:32:38:
我觉得你的这个不能说在细胞膜上  或者说 没有进入细胞   

蓝色细胞核纳米粒子一般式进入不了的  细胞核周围的还是有绿色的 反而可以说明可能进入细胞

你细胞的浓度太高，做这个细胞浓度低比较好，最好一个 ...


首先,非常感谢您的回帖,您的意见很中肯.
您说的很对,细胞核是肯定进不去的...
并且下次做的时候我会考虑降低细胞浓度的...
关于孵育的时间,我帖子的图是在孵育两个小时的情况下做的,我这次孵育两天试试看,如果时间过长我会考虑用您提到的24h...

另外您说的激光共聚焦相当于一个细胞进行切片那个理论我有点疑问,光路怎么会切片进入呢?如果吸附在细胞膜上方的纳米粒,照下来在一个平面上,看上去会不会就像是在细胞内了呢??不过我已经用细胞膜染料染了,马上准备再做了...

再次感谢您的回帖..
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5楼2012-02-11 22:02:31
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liuanan

专家顾问 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-12 16:06:38
表面修饰做了吗？水溶性咋样？
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2楼2012-02-11 14:35:49
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188283828

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuanan at 2012-02-11 14:35:49:
表面修饰做了吗？水溶性咋样？

做了氨基的修饰，水溶性较之前没有明显的变化。

但是纵观我做的所有的处方，水溶性都不是很好，只有个别的呈现分散的很好的状态。（我想您所说的水溶性是指分散性吧？毕竟硅胶也没法溶解在水里）
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3楼2012-02-11 16:10:39
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
188283828(金币+5): 很多思想就是我正在做的...非常感谢 2012-02-11 21:53:36
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2012-02-11 22:51:08
我觉得你的这个不能说在细胞膜上  或者说 没有进入细胞   

蓝色细胞核纳米粒子一般式进入不了的  细胞核周围的还是有绿色的 反而可以说明可能进入细胞

你细胞的浓度太高，做这个细胞浓度低比较好，最好一个视野只有几个，细胞不要聚集，这样在白光视野下你可以方便看出细胞的边界。也就是说可以还叠加一个白光的视野。

孵育的时间 一般也不用太长，24小时差不多。

从你的图片上看，不能确定纳米粒子就聚集在细胞膜上，不要纠结纳米粒子吸附在细胞膜上，你用激光共聚焦，只有在一个平面上的光信号才可以进入检测器，实际相当于在细胞中间进行切片，你可以参考下标记细胞膜的染料，这样的染料在激光共聚焦显微镜下，就是细胞膜一圈。

稀释下细胞浓度，在做一次，就可以得到你想要的图片了。
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4楼2012-02-11 19:32:38
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