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银虫

1楼 2012-01-26 16:22:10

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西瓜: 回帖置顶 2012-01-28 13:45:46

引用回帖:

楼: Originally posted by guojianping at 2012-01-27 20:24:09:
（1）是不是P错位置？可能P的大小一样，但是P错了地方，引物问题。可能有个基因和你的目的基因的引物段相似，大小也相似。我碰到过
（2）把你的问题好好说清楚，不行就上图，这样很难理解

三个样品，经同一批PCR后，所得产物经酶切并电泳后，明显分出不同的条带，即有三个基因型，如果将各相应原PCR产物测序应有不同的基因序列，但是我测序的结果却是相同的，就上此不解。

银虫

7楼2012-01-28 11:27:18

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西瓜: 回帖置顶 2012-01-28 13:45:48

如图，为酶切后电泳图。

银虫

8楼2012-01-28 11:32:08

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guojianping

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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析有条有理，连同上一贴一起授予EPI！ 2012-02-08 21:18:53

懂你意思了，你是说本来是有酶切位点的，现在突变了，位点没有了，是吧。几个问题（1）你是怎么突变的？具体是把酶切位点怎么了？不觉得很奇怪么？1,2泳道加起来就是野生型的大小，你自己用DNAMAN分析下是不是预期的结果？（2）把你的酶切重做一遍，胶照亮一点，看看是不是还有隐藏的条带没照出来？这样的话就能解释测序结果一样的问题了

11楼2012-01-29 21:26:28

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Charles-glh

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感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励交流~ 2012-01-27 05:40:04

电泳后的也要测序啊，为什么看不明白你说的什么意思？你是对比已经测序的序列?

2楼2012-01-26 21:26:20

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楼: Originally posted by Charles-glh at 2012-01-26 21:26:20:
电泳后的也要测序啊，为什么看不明白你说的什么意思？你是对比已经测序的序列?

酶切产物经电泳后有三种基因型，CC\CT\TT，分别将三种基因型的PCR产物直接测序，测序结果三者都看不出有没有什么不同。
酶切后的产物不需要测序吧？

银虫

3楼2012-01-27 10:18:30

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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-01-27 12:57:50

引用回帖:

3楼: Originally posted by hotmail at 2012-01-27 10:18:30:
酶切产物经电泳后有三种基因型，CC\CT\TT，分别将三种基因型的PCR产物直接测序，测序结果三者都看不出有没有什么不同。
酶切后的产物不需要测序吧？

你的实验目的究竟是什么呢？酶切能区分你所说的三种基因型吗？

4楼2012-01-27 12:36:23

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Charles-glh

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【答案】应助回帖

切开后竟然序列一致，不可能的。都分开条带了，肯定不一样！

5楼2012-01-27 14:18:59

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感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2012-01-27 23:47:18

（1）是不是P错位置？可能P的大小一样，但是P错了地方，引物问题。可能有个基因和你的目的基因的引物段相似，大小也相似。我碰到过
（2）把你的问题好好说清楚，不行就上图，这样很难理解

6楼2012-01-27 20:24:09

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西瓜(金币+4): Good！ 2012-01-29 11:27:11

（1）2,3泳道可能是相同的大小吧？从图上看也是一样的。
（2）测序的结果是最准的，所以断定是你的基因型问题
（3）你的基因型是什么方法改变的？要是通过载体的话，你的载体是什么？如果常见就重做吧，肯定不是测序问题。如果不常见就建议公司你的引物，可能引物的问题
（4）和你的原来没有改变过的野生型做对比，告诉我们结果
（5）请给出MARKER，酶切图要有的

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9楼2012-01-28 21:01:05

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楼: Originally posted by guojianping at 2012-01-28 21:01:05:
（1）2,3泳道可能是相同的大小吧？从图上看也是一样的。
（2）测序的结果是最准的，所以断定是你的基因型问题
（3）你的基因型是什么方法改变的？要是通过载体的话，你的载体是什么？如果常见就重做吧，肯定不是 ...

基因型由是否有基因突变决定的，如有突变，有酶切位点，经酶切后就有不同大小的基因片段，电泳后在不同位置显示，即为不同的基因型。
其中第三泳道的就是野生型。
再做一次看一下。
谢谢。