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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

[求助] PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致,是何原因?该如何处理?

PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致,是何原因?该如何处理?
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银虫
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Charles-glh

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励交流~ 2012-01-27 05:40:04
电泳后的也要测序啊,为什么看不明白你说的什么意思?你是对比已经测序的序列?
2楼2012-01-26 21:26:20
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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

引用回帖:
: Originally posted by Charles-glh at 2012-01-26 21:26:20:
电泳后的也要测序啊,为什么看不明白你说的什么意思?你是对比已经测序的序列?

酶切产物经电泳后有三种基因型,CC\CT\TT,分别将三种基因型的PCR产物直接测序,测序结果三者都看不出有没有什么不同。
酶切后的产物不需要测序吧?
银虫
3楼2012-01-27 10:18:30
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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-01-27 12:57:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by hotmail at 2012-01-27 10:18:30:
酶切产物经电泳后有三种基因型,CC\CT\TT,分别将三种基因型的PCR产物直接测序,测序结果三者都看不出有没有什么不同。
酶切后的产物不需要测序吧?

你的实验目的究竟是什么呢?酶切能区分你所说的三种基因型吗?
4楼2012-01-27 12:36:23
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Charles-glh

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

切开后竟然序列一致,不可能的。都分开条带了,肯定不一样!
5楼2012-01-27 14:18:59
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2012-01-27 23:47:18
(1)是不是P错位置?可能P的大小一样,但是P错了地方,引物问题。可能有个基因和你的目的基因的引物段相似,大小也相似。我碰到过
(2)把你的问题好好说清楚,不行就上图,这样很难理解
6楼2012-01-27 20:24:09
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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

西瓜: 回帖置顶 2012-01-28 13:45:46
引用回帖:
: Originally posted by guojianping at 2012-01-27 20:24:09:
(1)是不是P错位置?可能P的大小一样,但是P错了地方,引物问题。可能有个基因和你的目的基因的引物段相似,大小也相似。我碰到过
(2)把你的问题好好说清楚,不行就上图,这样很难理解

三个样品,经同一批PCR后,所得产物经酶切并电泳后,明显分出不同的条带,即有三个基因型,如果将各相应原PCR产物测序应有不同的基因序列,但是我测序的结果却是相同的,就上此不解。
银虫
7楼2012-01-28 11:27:18
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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

西瓜: 回帖置顶 2012-01-28 13:45:48
如图,为酶切后电泳图。


银虫
8楼2012-01-28 11:32:08
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good! 2012-01-29 11:27:11
(1)2,3泳道可能是相同的大小吧?从图上看也是一样的。
(2)测序的结果是最准的,所以断定是你的基因型问题
(3)你的基因型是什么方法改变的?要是通过载体的话,你的载体是什么?如果常见就重做吧,肯定不是测序问题。如果不常见就建议公司你的引物,可能引物的问题
(4)和你的原来没有改变过的野生型做对比,告诉我们结果
(5)请给出MARKER,酶切图要有的

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9楼2012-01-28 21:01:05
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hotmail

木虫 (小有名气)

银虫

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by guojianping at 2012-01-28 21:01:05:
(1)2,3泳道可能是相同的大小吧?从图上看也是一样的。
(2)测序的结果是最准的,所以断定是你的基因型问题
(3)你的基因型是什么方法改变的?要是通过载体的话,你的载体是什么?如果常见就重做吧,肯定不是 ...

基因型由是否有基因突变决定的,如有突变,有酶切位点,经酶切后就有不同大小的基因片段,电泳后在不同位置显示,即为不同的基因型。
其中第三泳道的就是野生型。
再做一次看一下。
谢谢。
银虫
10楼2012-01-29 19:30:42
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