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木虫 (小有名气)

银虫

[求助] PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？

PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
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银虫
1楼2012-01-26 16:22:10
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2012-01-27 23:47:18
（1）是不是P错位置？可能P的大小一样，但是P错了地方，引物问题。可能有个基因和你的目的基因的引物段相似，大小也相似。我碰到过
（2）把你的问题好好说清楚，不行就上图，这样很难理解
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6楼2012-01-27 20:24:09
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！ 2012-01-29 11:27:11
（1）2,3泳道可能是相同的大小吧？从图上看也是一样的。
（2）测序的结果是最准的，所以断定是你的基因型问题
（3）你的基因型是什么方法改变的？要是通过载体的话，你的载体是什么？如果常见就重做吧，肯定不是测序问题。如果不常见就建议公司你的引物，可能引物的问题
（4）和你的原来没有改变过的野生型做对比，告诉我们结果
（5）请给出MARKER，酶切图要有的
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hotmail
9楼2012-01-28 21:01:05
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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 分析有条有理，连同上一贴一起授予EPI！ 2012-02-08 21:18:53
懂你意思了，你是说本来是有酶切位点的，现在突变了，位点没有了，是吧。几个问题（1）你是怎么突变的？具体是把酶切位点怎么了？不觉得很奇怪么？1,2泳道加起来就是野生型的大小，你自己用DNAMAN分析下是不是预期的结果？（2）把你的酶切重做一遍，胶照亮一点，看看是不是还有隐藏的条带没照出来？这样的话就能解释测序结果一样的问题了
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11楼2012-01-29 21:26:28
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