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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » R基因两侧如何设计引物
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qian0wei

银虫 (初入文坛)

[求助] R基因两侧如何设计引物

当前定位的抗病基因的目标区域内有两个R基因，这两个R基因高度同源，UTR区也同源，如何设计引物，将这两个基因分别的扩出来，
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1楼 2012-01-12 21:46:56
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个确实是问题，总会有不一样的序列，硬着头皮去手工设计。
也可以利用BAC想想办法，酶切，扩增，等等。
图位克隆抗病基因很难，没有可参考的一定能成功的方法
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真相是最大的奢侈品
2楼2012-01-12 22:54:55
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
虽然同源，但是不完全一样，不知道能不能根据GC含量的差异采用不同的退火温度？希望对楼主有帮助
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3楼2012-01-13 08:41:18
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果是这样，那太好了，设一对引物就可以把2个基因都扩出来，然后连到载体上，测序，一下就把2个基因都拿到手了，，
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4楼2012-01-13 21:17:57
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jiaxinfish

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

连到载体上挑单克隆测序
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5楼2012-01-13 21:18:49
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wanhj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
在抗感材料种把这两个基因都扩增出来，发现SNP或在酶切位点
进行共分离定位；或在生物信息学来确定
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6楼2012-01-14 12:09:40
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qian0wei

银虫 (初入文坛)
wanhscn: 不知道是什么作物？可以让公司代建BAC！ 2012-03-07 22:01:02
引用回帖:
楼: Originally posted by wanhscn at 2012-01-12 22:54:55:
这个确实是问题，总会有不一样的序列，硬着头皮去手工设计。
也可以利用BAC想想办法，酶切，扩增，等等。
图位克隆抗病基因很难，没有可参考的一定能成功的方法

BAC是非常好的办法，就是当前手头上没有BAC，呵呵，谢谢
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7楼2012-03-07 20:54:13
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a731705125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是先都扩出来再通过电泳等分离开？
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8楼2012-03-07 22:08:52
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