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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮我看一下这奇怪的电泳图
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chunqizzm

银虫 (小有名气)

[求助] 帮我看一下这奇怪的电泳图

麻烦各位大神帮我看一下，
第一张图的第3道与第6道和第二张图的第2道与第3道是同一个样品。只是跑胶日期不一样。
为什么第一张图会跑成这个样呢？？
PS：20120112-15:55  有人提出可能是凝胶的问题。


另外，本人刚接触SDS-PAGE，想多认识几位这方面前辈，平时有疑问时有个解疑的人。[ Last edited by chunqizzm on 2012-1-12 at 15:53 ]
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1楼 2012-01-12 15:31:18
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dingnan8822

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-01-31 12:41:14
chunqizzm: 回帖置顶 2012-02-13 11:30:26
chunqizzm(金币+10): ★有帮助 2012-02-28 18:05:46
应该不是胶的问题，是样品提取的问题吧，你的样放了几天再跑，条带就清楚多了，应该是当时裂解的不充分。遇到这种问题时，上样前把样煮一下，或者提取时把样超声一下，都会好很多。
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chunqizzm chunqizzm chunqizzm
2楼2012-01-18 15:16:31
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by dingnan8822 at 2012-01-18 15:16:31:
应该不是胶的问题，是样品提取的问题吧，你的样放了几天再跑，条带就清楚多了，应该是当时裂解的不充分。遇到这种问题时，上样前把样煮一下，或者提取时把样超声一下，都会好很多。

你提到的" 裂解不充分"是说加样品缓冲液后裂解不充分吗？
我这点样前都是要煮7分钟的，应该不会出现裂解不充分的情况。不过有时会把煮过的样放在4度冰箱第二天才点样，而且点样前都没再煮。可能这一步会有问题。
另外第一块胶的Marker，也不正常。
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3楼2012-01-31 09:37:53
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by dingnan8822 at 2012-01-18 15:16:31:
应该不是胶的问题，是样品提取的问题吧，你的样放了几天再跑，条带就清楚多了，应该是当时裂解的不充分。遇到这种问题时，上样前把样煮一下，或者提取时把样超声一下，都会好很多。

你提到的" 裂解不充分"是说加样品缓冲液后裂解不充分吗？
我这点样前都是要煮7分钟的，应该不会出现裂解不充分的情况。不过有时会把煮过的样放在4度冰箱第二天才点样，而且点样前都没再煮。可能这一步会有问题。
另外第一块胶的Marker，也不正常。
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4楼2012-01-31 09:38:11
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
silicare(屏蔽内容): 重复 2012-01-31 12:41:40
本帖内容被屏蔽
5楼2012-01-31 09:38:30
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dingnan8822

铁杆木虫 (著名写手)
chunqizzm: 回帖置顶 2012-02-28 18:04:28
chunqizzm: 取消置顶 2012-03-19 22:02:11
我说的确实是裂解不充分的意思，不知道最近还有没有出过类似问题呢？
因为蛋白提取一个很传统的做法就是对提取的样本反复冻融，效果会好很多~
你是不是怀疑胶有问题？其实我看第一块胶MARKER还是跑得不错，比较清楚，就是有点拖尾的感觉，有可能上层胶制的不好，再具体真说不上来~
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6楼2012-01-31 13:53:01
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
大家做SDS-PAGE的时候是用什么软件定量的啊？
定量的标准品是用BFGF吗？？
有没有出现每次定纯度时BFGF的纯度百分数都不一样啊(相差10个百分点)？从图上看主要表现是BFGF下面会有一堆疑似降解的条带 。
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7楼2012-02-13 11:38:10
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