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孙启亮

金虫 (著名写手)

[求助] 请教下，做梯度荧光定量摸索条件时得到两个峰

做梯度RT-RCR时溶解曲线得到两个峰但是跑胶时却只有一条带，求解释，分析




[ Last edited by 孙启亮 on 2012-1-11 at 17:06 ]
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1楼 2012-01-11 17:05:25
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wdrltz

荣誉版主 (文坛精英)

ATM

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+3): 赞同！ 2012-02-08 16:39:42
上学那会做多一点，不是专业搞分子的，呵呵
溶解曲线得到两个峰应该是有引物二聚体，由于引物设计不当；
跑胶时的那一条带应该是目标产物，不知道你的产物大小是多少（150bp左右？），引物二聚体一般不会有明显的带出现，大多是小于100bp的片状涂抹
赞一下(1人) 回复此楼
如果有一天，我老无所依，请把我埋在新闻联播里……
2楼2012-02-08 15:22:49
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孙启亮(金币+1): ★有帮助 谢谢 2012-02-09 08:58:37
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-09 13:36:48
其中一条带是目的片段，另一条带可能是引物二聚体也可能是非特异性扩增，如果非特异性扩增片段与你的目的片段长度相差不大跑胶是分辨不出来的
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2012-02-08 16:39:02
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孙启亮

金虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by 空谷幽风 at 2012-02-08 16:39:02:
其中一条带是目的片段，另一条带可能是引物二聚体也可能是非特异性扩增，如果非特异性扩增片段与你的目的片段长度相差不大跑胶是分辨不出来的

谢谢，分析的很有道理，我的片段不大，也就是100左右，另外我发现我的上下游引物的Tm值也相差太大了
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4楼2012-02-09 08:58:25
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