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651424759

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 136.3
帖子: 25
在线: 7.7小时
虫号: 957948
注册: 2010-02-28
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] overlap PCR做不出来呐。。。。

连接两个片段，分别PCR均P出来，连接做不出来，试过好几次了。片段分别为1500和3000，变性时间2min，延伸5min。求助各位前辈。。。不甚感激！！！

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1楼2012-01-09 10:09:42

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fwks3518

木虫 (正式写手)

应助: 28 (小学生)
金币: 4696.9
红花: 1
帖子: 368
在线: 146.1小时
虫号: 589028
注册: 2008-08-29
专业: 微生物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励交流！不过融合后的量一般很少，也可以不纯化直接作为模板大量扩增的。 2012-01-09 17:50:14

1、扩增A: 1.5k和B：3k的两个片段，纯化后备用
2、以纯化后的A、B片段为模板，以A的5‘端引物和B的3’端引物来进行重叠PCR
3、PCR产物胶回收，切4.5K片段纯化。
4、以该片段为模板，大量扩增

赞一下(2人)

3楼2012-01-09 14:12:26

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