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651424759

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 136.3
帖子: 25
在线: 7.7小时
虫号: 957948
注册: 2010-02-28
专业: 生物大分子结构与功能

[求助] overlap PCR做不出来呐。。。。

连接两个片段，分别PCR均P出来，连接做不出来，试过好几次了。片段分别为1500和3000，变性时间2min，延伸5min。求助各位前辈。。。不甚感激！！！

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1楼2012-01-09 10:09:42

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wk990240

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 30
帖子: 9
在线: 3.1小时
虫号: 574791
注册: 2008-06-17
性别: GG
专业: 植物遗传学

如果条件充许，可以分钟克隆两个片段，比如A和B，并且在A的3端和B的5端加上共有的酶切位点，直接两个片段回收后，同时连进表达载体。我经常这样操作，没有大问题的。祝楼主成功。

赞一下(1人)

15楼2012-05-28 14:36:34

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