应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 怎样鉴定毕赤（GS115）重组菌是胞内还是胞外表达
61/1返回列表
查看: 2013  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[交流] 怎样鉴定毕赤（GS115）重组菌是胞内还是胞外表达

我最近在做毕赤酵母的表达。一直以为只要在GS115中表达的都是分泌型，但是看了一下好象不是。请教这方面的高手，怎么鉴定？我是直接用EcoR I 单酶切位点插入pPic9k上的多克隆位点的，做了MM/MD平板鉴定，重组子是甲醇利用缓慢型的，可是做过两次发酵了，取的上清跑蛋白电泳好像是比空白多了一个条带（条带都比较浅，所以不确定）可是测定酶活时是没有酶活的。请问大家都是怎么做的？比较急，希望多出建议，谢谢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-12-29 15:52:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-12-29 17:32:25
houhoujiayou(金币+5): 谢谢你的回答，我已经用超滤管浓缩了 2012-01-02 13:56:01
是否是分泌型表达，是看你用的载体，不是看宿主。
pPic9k是分泌型表达载体，因此你的蛋白是分泌到胞外地。
没有酶活也可能是你蛋白含量较少，做浓缩吧，利用超滤管就行。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-12-29 16:35:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

austin2008

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励交流！ 2011-12-30 22:47:15
houhoujiayou(金币+1): 2012-01-02 14:11:26
是否是分泌型表达，是看你用的载体，而不是看宿主。你用的载体是分泌表达载体，没表达的原因很多，建议你好好看看毕赤酵母表达手册，先把基本问题搞清楚
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-12-30 19:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zuoyue911

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
4楼2011-12-31 02:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+1): 热心 2011-12-31 14:37:26
wanhscn(金币+1): 热心 2011-12-31 14:37:35
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4002082，写的很详细，自己下载来看吧
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2011-12-31 11:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foresthaust

金虫 (小有名气)
学习中
回复此楼
6楼2012-03-17 22:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 houhoujiayou 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭