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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)


[交流] 为什么我的AOA的amoA基因扩增不亮

最近一直在做 AOA的amoA基因的T-RFLP实验,用的引物是Arch-amoAF/AR,有些样品老是扩增不出来,不知道有哪些朋友也在做这方面的实验,请指教!
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在雨中

金虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
鬼娃娃不要天(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励交流!GOOD! 2011-12-27 16:16:09
偶做过。呵呵。
你要注意你的样品,如果样品中没有这个基因,肯定扩增不出呀。
我曾经对一批土壤样品扩增,发现无法扩增,定量也Ct值超大,无扩增条带。最终得出,样品中无AOA amoA基因的结论。
2楼2011-12-27 09:33:28
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
鬼娃娃不要天(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励交流!有意思! 2011-12-27 16:16:32
引用回帖:
2楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-12-27 09:33:28:
偶做过。呵呵。
你要注意你的样品,如果样品中没有这个基因,肯定扩增不出呀。
我曾经对一批土壤样品扩增,发现无法扩增,定量也Ct值超大,无扩增条带。最终得出,样品中无AOA amoA基因的结论。

那我敢保证你的出来的结论有点仓促了   
aoa 在土壤环境中分布及其广泛 比AOB 数量和分布还广

扩不出来可能是DNA 质量不高 或者其他因素~~ 土壤中没有 可能性不大啊
3楼2011-12-27 09:50:23
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在雨中

金虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-12-27 09:50:23:
那我敢保证你的出来的结论有点仓促了   
aoa 在土壤环境中分布及其广泛 比AOB 数量和分布还广

扩不出来可能是DNA 质量不高 或者其他因素~~ 土壤中没有 可能性不大啊

呵呵。
有的土壤中有,有的土壤中没有。凡事无绝对。
4楼2011-12-27 12:03:38
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鬼娃娃不要天

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
: Originally posted by 在雨中 at 2011-12-27 09:33:28:
偶做过。呵呵。
你要注意你的样品,如果样品中没有这个基因,肯定扩增不出呀。
我曾经对一批土壤样品扩增,发现无法扩增,定量也Ct值超大,无扩增条带。最终得出,样品中无AOA amoA基因的结论。

那请问你做的样品是什么生境的?选用什么限制性酶酶切?
5楼2012-02-11 19:52:46
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haocuihua

新虫 (初入文坛)



鬼娃娃不要天(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
2楼: Originally posted by 在雨中 at 2011-12-27 09:33:28
偶做过。呵呵。
你要注意你的样品,如果样品中没有这个基因,肯定扩增不出呀。
我曾经对一批土壤样品扩增,发现无法扩增,定量也Ct值超大,无扩增条带。最终得出,样品中无AOA amoA基因的结论。

我这两天也遇到了同样的问题,三个样品,两个有结果,一个怎么都没有
6楼2014-03-11 14:20:11
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haocuihua

新虫 (初入文坛)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-12-27 09:50:23
那我敢保证你的出来的结论有点仓促了   
aoa 在土壤环境中分布及其广泛 比AOB 数量和分布还广

扩不出来可能是DNA 质量不高 或者其他因素~~ 土壤中没有 可能性不大啊...

我用的是试剂盒提的,质量挺好啊!也是有一个样品没有,求分析
7楼2014-03-11 14:22:11
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一纸淡然

铜虫 (初入文坛)



鬼娃娃不要天(金币+1): 谢谢参与
请问楼主做出来了吗,我现在也是一直P不出来,一直找不到原因,各种方法都试过了~~~
8楼2014-06-11 16:11:55
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一纸淡然

铜虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by haocuihua at 2014-03-11 14:22:11
我用的是试剂盒提的,质量挺好啊!也是有一个样品没有,求分析...

请问你用的什么试剂盒?哪个牌子的taq?PCR反应有没有加BSA?
9楼2014-06-12 10:56:49
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