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气沉丹田

木虫 (小有名气)

[求助] 做壳聚糖的FITC标记,如何测FITC结合含量?

最大的问题是壳聚糖只能在酸性环境下溶解,大于7.4就沉淀出来。而FITC又必须在碱性环境下才有强荧光。用分光光度计粗略测量时候,结合了FITC的壳聚糖的A值很高,但是做FITC的标准曲线A值却很低(用1%醋酸和甲醇1:1混合试剂溶解),测得的样品含FITC量都比反应时加的FITC高,为什么呢?和糖结合了反而不容易淬灭了么?现在要去做荧光检测,会有不同吗?
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)

你考虑下有没有必要来定量,如果只是用来示踪,就没有必要那么认真。标记后也可以看到有没有进入细胞之内的。

如果像你说的那样是ph的原因导致的,你也可以尝试下罗丹明这样的染料,或者其他的对ph不敏感的染料。
海纳百川有容乃大;自强不息止于至善。
2楼2011-12-23 14:05:57
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气沉丹田

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by huquan0_0 at 2011-12-23 14:05:57:
你考虑下有没有必要来定量,如果只是用来示踪,就没有必要那么认真。标记后也可以看到有没有进入细胞之内的。

如果像你说的那样是ph的原因导致的,你也可以尝试下罗丹明这样的染料,或者其他的对ph不敏感的染料。

定量还是有必要的,需要通过测定FITC含量计算壳聚糖含量。做荧光在很低的含量下好像还可以。但是稀释起来太麻烦了。
3楼2011-12-24 08:29:51
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nanocyq

木虫 (著名写手)

楼主是怎么反应连接的   怎么去除未反应的FITC的
4楼2011-12-24 09:15:20
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气沉丹田

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by nanocyq at 2011-12-24 09:15:20:
楼主是怎么反应连接的   怎么去除未反应的FITC的

直接混匀振荡反应24小时,碱沉淀,离心,70%乙醇溶液多次洗涤。结合的还是很明显。
5楼2011-12-25 23:22:29
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)


mwyuer: 金币+1, 欢迎常来生物材料版 2012-07-16 08:06:46
楼主还会回复么,壳聚糖不好溶,你是用什么做溶剂反应24小时的,是1%醋酸和水吗,会对原料有影响吗?
6楼2012-07-15 23:06:40
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气沉丹田

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 奇幻之旅 at 2012-07-15 23:06:40
楼主还会回复么,壳聚糖不好溶,你是用什么做溶剂反应24小时的,是1%醋酸和水吗,会对原料有影响吗?

用醋酸稀溶液,0.6%,1%都用过。最后还是用的0.6%的。你意思是对什么原料?做药物的时候,对药物结合什么的没什么影响。
7楼2012-07-16 06:42:51
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 气沉丹田 at 2012-07-16 06:42:51
用醋酸稀溶液,0.6%,1%都用过。最后还是用的0.6%的。你意思是对什么原料?做药物的时候,对药物结合什么的没什么影响。...

先谢下楼主,我看好多做FITC都要在碱性条件下,醋酸中也可以做得上吗?
8楼2012-07-18 09:50:38
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气沉丹田

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 奇幻之旅 at 2012-07-18 09:50:38
先谢下楼主,我看好多做FITC都要在碱性条件下,醋酸中也可以做得上吗?...

略酸的环境下,只要FITC溶解了,一样可以结合上,只是测定时数值低。可以微调PH。最终测生物组织时用生理盐水,PH到7影响就不大了。
9楼2012-07-19 05:03:20
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 气沉丹田 at 2012-07-19 05:03:20
略酸的环境下,只要FITC溶解了,一样可以结合上,只是测定时数值低。可以微调PH。最终测生物组织时用生理盐水,PH到7影响就不大了。...

谢谢噢~~
10楼2012-07-19 09:22:52
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