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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 做壳聚糖的FITC标记，如何测FITC结合含量？
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气沉丹田

木虫 (小有名气)

[求助] 做壳聚糖的FITC标记，如何测FITC结合含量？

最大的问题是壳聚糖只能在酸性环境下溶解，大于7.4就沉淀出来。而FITC又必须在碱性环境下才有强荧光。用分光光度计粗略测量时候，结合了FITC的壳聚糖的A值很高，但是做FITC的标准曲线A值却很低（用1%醋酸和甲醇1:1混合试剂溶解），测得的样品含FITC量都比反应时加的FITC高，为什么呢？和糖结合了反而不容易淬灭了么？现在要去做荧光检测，会有不同吗？
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1楼 2011-12-23 10:12:26
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huquan0_0

捐助贵宾 (正式写手)
你考虑下有没有必要来定量，如果只是用来示踪，就没有必要那么认真。标记后也可以看到有没有进入细胞之内的。

如果像你说的那样是ph的原因导致的，你也可以尝试下罗丹明这样的染料，或者其他的对ph不敏感的染料。
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海纳百川有容乃大；自强不息止于至善。
2楼2011-12-23 14:05:57
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气沉丹田

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by huquan0_0 at 2011-12-23 14:05:57:
你考虑下有没有必要来定量，如果只是用来示踪，就没有必要那么认真。标记后也可以看到有没有进入细胞之内的。

如果像你说的那样是ph的原因导致的，你也可以尝试下罗丹明这样的染料，或者其他的对ph不敏感的染料。

定量还是有必要的，需要通过测定FITC含量计算壳聚糖含量。做荧光在很低的含量下好像还可以。但是稀释起来太麻烦了。
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3楼2011-12-24 08:29:51
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nanocyq

木虫 (著名写手)
楼主是怎么反应连接的   怎么去除未反应的FITC的
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4楼2011-12-24 09:15:20
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气沉丹田

木虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by nanocyq at 2011-12-24 09:15:20:
楼主是怎么反应连接的   怎么去除未反应的FITC的

直接混匀振荡反应24小时，碱沉淀，离心，70%乙醇溶液多次洗涤。结合的还是很明显。
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5楼2011-12-25 23:22:29
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)
★
mwyuer: 金币+1, 欢迎常来生物材料版 2012-07-16 08:06:46
楼主还会回复么，壳聚糖不好溶，你是用什么做溶剂反应24小时的，是1%醋酸和水吗，会对原料有影响吗？
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6楼2012-07-15 23:06:40
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气沉丹田

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 奇幻之旅 at 2012-07-15 23:06:40
楼主还会回复么，壳聚糖不好溶，你是用什么做溶剂反应24小时的，是1%醋酸和水吗，会对原料有影响吗？

用醋酸稀溶液，0.6%，1%都用过。最后还是用的0.6%的。你意思是对什么原料？做药物的时候，对药物结合什么的没什么影响。
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7楼2012-07-16 06:42:51
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 气沉丹田 at 2012-07-16 06:42:51
用醋酸稀溶液，0.6%，1%都用过。最后还是用的0.6%的。你意思是对什么原料？做药物的时候，对药物结合什么的没什么影响。...

先谢下楼主，我看好多做FITC都要在碱性条件下，醋酸中也可以做得上吗？
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8楼2012-07-18 09:50:38
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气沉丹田

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 奇幻之旅 at 2012-07-18 09:50:38
先谢下楼主，我看好多做FITC都要在碱性条件下，醋酸中也可以做得上吗？...

略酸的环境下，只要FITC溶解了，一样可以结合上，只是测定时数值低。可以微调PH。最终测生物组织时用生理盐水，PH到7影响就不大了。
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9楼2012-07-19 05:03:20
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奇幻之旅

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 气沉丹田 at 2012-07-19 05:03:20
略酸的环境下，只要FITC溶解了，一样可以结合上，只是测定时数值低。可以微调PH。最终测生物组织时用生理盐水，PH到7影响就不大了。...

谢谢噢~~
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10楼2012-07-19 09:22:52
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