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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】FITC与短肽的连接问题,直接混合 已有7人参与

我看到文献中关于FITC与短肽的连接是通过直接混合实现的
是不是FITC可以与短肽中的氨基反应,或者其它原因
反应短肽的氨基与FITC的摩尔比或短肽与FITC的质量比如何设定呢
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luwowo

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):新虫,鼓励下,欢迎常来~~ 2010-08-03 21:14:46
蜗牛VS蜗牛(金币+3): 2010-08-04 08:41:07
我没做过短肽,但是我曾经做过FITC标记胶原蛋白,的确相互混合就能反应,没什么特异性。一般染料会过量,所以可能事后处理会比较麻烦,一定要把单体透析干净,而且不保证不会有单体残留。
2楼2010-08-03 12:43:17
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by luwowo at 2010-08-03 12:43:17:
我没做过短肽,但是我曾经做过FITC标记胶原蛋白,的确相互混合就能反应,没什么特异性。一般染料会过量,所以可能事后处理会比较麻烦,一定要把单体透析干净,而且不保证不会有单体残留。

即使透析,也要大体确定可能的结合比例
不然浪费是不科学的
3楼2010-08-03 20:55:52
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

而且我用的FITC是用高分子物质修饰的,穿不透细胞膜
4楼2010-08-03 20:56:19
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hsiaohu

新虫 (小有名气)

★ ★
看天(金币+1):鼓励新人交流 2010-08-07 00:11:35
scelab(金币+1):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-07 09:39:54
FITC的异硫氰基很容易与蛋白质的氨基反应,搅一搅就可以,透析纯化。
在孤獨中享受寂寞,在寂寞中厮殺黎明。我需要的是安靜与潜心。
5楼2010-08-03 23:05:32
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蜗牛VS蜗牛

捐助贵宾 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hsiaohu at 2010-08-03 23:05:32:
FITC的异硫氰基很容易与蛋白质的氨基反应,搅一搅就可以,透析纯化。

FITC被葡聚糖修饰后,异硫氰基不消失吧,有多少个这样的基团
6楼2010-08-04 08:42:16
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


看天(金币+1):鼓励 2010-08-07 00:11:11
用交联缓冲液,这个配方到处都是,关键点是ph要调好,酸性下FITC会不可逆淬灭的
7楼2010-08-04 09:23:27
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hsiaohu

新虫 (小有名气)

★ ★
看天(金币+2):鼓励 2010-08-07 00:11:00
蜗牛VS蜗牛(金币+7): 2010-09-02 06:57:10
引用回帖:
Originally posted by 蜗牛VS蜗牛 at 2010-08-04 08:42:16:

FITC被葡聚糖修饰后,异硫氰基不消失吧,有多少个这样的基团

FITC的结构很容易查到。要看看葡聚糖怎么修饰FITC,如果共价连接到异硫氰基或者由于空间位阻阻止异硫氰基发挥作用,有效异硫氰基数都会减少,不过做个标记反应还是足够的

缓冲液要碱性的,我都用pH 9.0的CBS。
在孤獨中享受寂寞,在寂寞中厮殺黎明。我需要的是安靜与潜心。
8楼2010-08-07 00:04:35
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zdy1398

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用PH9的碳酸盐缓冲液,4℃ 避光 8h
我也做FITC与肽的连接,请问你连接上以后FITC-peptide在酸性条件下会不会水解?
9楼2010-12-15 13:34:02
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xhjggl

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们一直用上海生工进口的蛋白FITC荧光素标记试剂盒,质量很好,也很方便。
HOOK™ Dye Labeling Kit (FITC)
蛋白FITC荧光素标记试剂盒       
Description:
FITC (fluorescein isothiocyanate) is a commonly used fluorescent label for proteins, as it contains the groups required for conjugating to amino, sulfhydryl, imidazoyl, tyrosyl or carbonyl groups of proteins. FITC has a molecular weight of 389, and excitation and emission wavelengths of 494nm and 520nm, respectively, therefore emitting green visible light.This kit utilizes Tube-O-Reactor™, which allows for the reactions to be performed in a single tube, with no loss of essential reagents and minimum hands-on time and effort.
Features:
Dye preweighed and supplied in single use  vials (Also available separately);Suitable for most proteins;Utilizes single Tube Reactor for minimum hands on time.application for Labeling of a green fluorescent dye to proteins and peptides. And Suitable for antibody labeling. Store: -15~-20℃
编号        包装        价格        产地
786-059        5 Reactions        2,486        GBios
10楼2010-12-15 14:04:42
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