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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有木有人做过Taqman 探针法Real-Time?? 已有1人参与

我要检测基因组中插入的某个外源片段的拷贝数,需要做绝对定量。师兄建议不要用sybr 燃料做,建议用探针法做。现在毫无头绪,不知道怎么设计,怎么合成?望各位高人指点一下……
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austin2008

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流! 2011-12-24 15:27:53
引用回帖:
10楼: Originally posted by shaquila at 2011-12-23 10:00:20:
还好吧,转基因能插入多少多少拷贝呢,至少在植物转化中,几乎所有文献都是用southern杂交检测,有尝试过用荧光定量,但是效果显然不如此法准确,至少存在争议

下面是探讨用荧光定量验证植物转基因拷贝数的文 ...

你贴出的文献分别是2002和2004年的,荧光定量PCR技术发展很快的,现在的情况与以前相比,无论是准确度、灵敏度、重复性、操作稳定性和价格方面都比southern杂交检测方法好的!当然做转基因,拷贝数可能比较低,southern杂交精确度还可以,微生物中转入基因拷贝数多的时候,这种传统的方法可能不是那么好使呢。至于你在上文中提到的“判断拷贝数用单酶切来判断,用两个以上酶来单切,这个是目前公认最有效的方法 ”,我还没听过,也没见过呢,你可以给出这种“目前公认最有效的方法”的文献吧,谢谢
优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
15楼2011-12-24 10:47:49
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love_st

金虫 (著名写手)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
设计引物探针,构建质粒,定量
2楼2011-12-22 16:45:28
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shaquila

金虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-12-22 18:29:07
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变
3楼2011-12-22 18:04:14
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flytime1115

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by shaquila at 2011-12-22 18:04:14:
楼主做的是专基因检测吗?如果是,那不建议用荧光定量,主流的方法用SOUTHERN杂交。TAQMAN可以让公司设计合成,sybr法也能做,两种方法没有质变

是做转基因检测,southern杂交在做,可是无法确定拷贝数,仅仅根据灰度值判断,觉得不太靠谱
4楼2011-12-22 19:37:05
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