24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2131  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 表达载体双酶切

本人从T载体上切下目的片段,连到表达载体pQE30上用的是ECORI和SPHI但是酶切就是很难切下来
回复此楼
寻找方向,前进
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone(金币+2): 支持 2011-12-20 23:55:26
junxiao0320: 金币+2 2012-03-16 22:03:56
junxiao0320: 金币+3 2012-03-18 14:53:56
双酶切找个兼容的Buffer很重要,如果找不到能提供两个酶50%活力的buffer,一个办法是增加酶量和酶切时间,但可能出现星号活力,还有一个办法就是分两次单酶切,各选择最高活性的buffer,这个办法可行,就是麻烦点。
5楼2011-12-20 22:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-20 15:08:34
junxiao0320(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢您,我试一下, 2011-12-20 19:46:33
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:32
SPHI是不是酶切效率不高,能不能加大酶量过夜酶切?再有NEB他们现在有许多HF的酶,楼主可以查一下看有没有SPHI。
jiayoubashaonian
2楼2011-12-20 11:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
junxiao0320: 金币+2 2012-03-16 22:03:26
楼上说的对,这种情况只能换好一点酶试试了,要不就只能换酶切位点
在等待中涅槃重生
3楼2011-12-20 14:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone(金币+3): 值得注意 2011-12-20 23:55:09
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:46
你用的是哪个公司的酶,双酶切时要注意下列多种因素:
Buffer是否兼容;酶量是否足够(不同公司在定义酶的活性单位时用的底物并不完全相同,因而即使相同名字的酶,如来自不同的公司,使用量也不尽相同,根据酶单位定义的底物可以进行大致的估算);控制酶切体系的甘油浓度(小于10%);当然质粒的质量也很重要。
4楼2011-12-20 21:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 机械专硕273请求调剂 +5 庚申壬申 2026-04-07 5/250 2026-04-08 11:46 by zhyzzh
[考研] 0703化学调剂325分 +13 15771691647 2026-04-04 14/700 2026-04-08 10:28 by screening
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 计算机11408 287 求调剂 +3 LiLe5 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:15 by shanqishi
[考研] 334分机械专硕求调剂 +3 蛋花紫菜汤 2026-04-03 3/150 2026-04-07 14:49 by 逍遥cocoa
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
[考研] 一志愿211生物学280分 求调剂 +5 李rien 2026-04-05 5/250 2026-04-06 10:30 by zhyzzh
[考研] 求调剂 +5 wos666 2026-04-03 5/250 2026-04-06 10:13 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +5 chenxrlkx 2026-04-05 7/350 2026-04-06 07:54 by houyaoxu
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 工科08专硕机械275求调剂 +3 AaAa7420 2026-04-02 3/150 2026-04-05 13:26 by jp9609
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 求调剂22408 288分 +5 new382 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:13 by 醉在风里
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
信息提示
请填处理意见