应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体双酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2120  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

junxiao0320

金虫 (小有名气)

学生

[求助] 表达载体双酶切

本人从T载体上切下目的片段，连到表达载体pQE30上用的是ECORI和SPHI但是酶切就是很难切下来
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
寻找方向，前进
1楼 2011-12-20 09:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
junxiao0320: 金币+2 2012-03-16 22:03:26
楼上说的对，这种情况只能换好一点酶试试了，要不就只能换酶切位点
赞一下 回复此楼
在等待中涅槃重生
3楼2011-12-20 14:31:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-20 15:08:34
junxiao0320(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢您，我试一下， 2011-12-20 19:46:33
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:32
SPHI是不是酶切效率不高，能不能加大酶量过夜酶切？再有NEB他们现在有许多HF的酶，楼主可以查一下看有没有SPHI。
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
2楼2011-12-20 11:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+3): 值得注意 2011-12-20 23:55:09
junxiao0320: 金币+4 2012-03-16 22:03:46
你用的是哪个公司的酶，双酶切时要注意下列多种因素：
Buffer是否兼容；酶量是否足够（不同公司在定义酶的活性单位时用的底物并不完全相同，因而即使相同名字的酶，如来自不同的公司，使用量也不尽相同，根据酶单位定义的底物可以进行大致的估算）；控制酶切体系的甘油浓度（小于10%）；当然质粒的质量也很重要。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-12-20 21:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+2): 支持 2011-12-20 23:55:26
junxiao0320: 金币+2 2012-03-16 22:03:56
junxiao0320: 金币+3 2012-03-18 14:53:56
双酶切找个兼容的Buffer很重要，如果找不到能提供两个酶50%活力的buffer，一个办法是增加酶量和酶切时间，但可能出现星号活力，还有一个办法就是分两次单酶切，各选择最高活性的buffer，这个办法可行，就是麻烦点。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-12-20 22:41:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703调剂 +16 拾玖壹 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:49 by flydream1314
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +5 独酌wl 2026-04-06 5/250 2026-04-06 17:23 by 土木硕士招生
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-06 3/150 2026-04-06 15:36 by going home
[考研] 专硕304找调剂，一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 本科211，293分请求调剂 +8 莲菜就是藕吧 2026-04-03 9/450 2026-04-05 19:12 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 复试调剂 +8 春日来信- 2026-04-03 8/400 2026-04-05 18:58 by 蓝云思雨
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 调剂 +8 熊二想上岸 2026-04-04 8/400 2026-04-05 05:27 by houyaoxu
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:08 by 啵啵啵0119
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭