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ln031101

铜虫 (小有名气)

[求助] 新手提RNA,请教几个问题

小鼠脾细胞,用试剂盒提的RNA,提了两次结果都差不多,所有器皿我都已经处理过了,这是降解的很严重吗?
1,整个提取过程需要在冰上进行吗?试剂盒说明书上并没有明确提到
2.  整个操作过程大概保证在多长时间内完成?因为第一次提,过程很不熟练,我觉得整个操作有点慢
3.  如何能避免基因组DNA污染?第一步裂解细胞试剂盒protocol写充分震荡,怎么掌握强度?过于剧烈会不会造成基因组DNA断裂?
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ln031101

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by shaquila at 2011-12-18 08:50:59:
我觉得是不是你样品保存的问题,我不是做动物的。但是取样后应该马上液氮速冻后放负80。不知道你用什么盒子,是否液氮研磨,其他操作一般都要在rt,低温可能导致裂解液效果不佳。

我是将小鼠脾细胞分离出来,药物处理几个小时,然后提的RNA,不知道在这个过程中对细胞RNA有没有影响?
5楼2011-12-18 11:02:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ln031101(金币+3): 谢谢!! 2011-12-18 10:59:49
提的效果不佳,点样孔附近很亮,怀疑有DNA污染
1 按说明来,不过我觉得在冰上做比较好
2 肯定是越快越好,但只要你不是慢得离谱,我觉得提取时间只可能影响结果好坏而非有无。
3 DNA污染部分,酚氯仿抽提吸上清这一步,少吸点会有帮助。如果污染仍很严重,可以用无RNA酶活性的DNA酶处理。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
2楼2011-12-18 04:36:03
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ln031101(金币+3): 谢谢!! 2011-12-18 11:01:38
我觉得是不是你样品保存的问题,我不是做动物的。但是取样后应该马上液氮速冻后放负80。不知道你用什么盒子,是否液氮研磨,其他操作一般都要在rt,低温可能导致裂解液效果不佳。
3楼2011-12-18 08:50:59
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ln031101

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by starseacow at 2011-12-18 04:36:03:
提的效果不佳,点样孔附近很亮,怀疑有DNA污染
1 按说明来,不过我觉得在冰上做比较好
2 肯定是越快越好,但只要你不是慢得离谱,我觉得提取时间只可能影响结果好坏而非有无。
3 DNA污染部分,酚氯仿抽提吸上清 ...

那在泳道前面那部分弥散状的时降解的RNA还是别的什么??
4楼2011-12-18 11:01:23
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