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longrna

新虫 (正式写手)

MolEPI: 7
应助: 75 (初中生)
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虫号: 1473815
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性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2, MolEPI+1): 热心！专业！经研究授予专家指数一枚！ 2011-12-19 16:42:57
ln031101(金币+5): 太感谢了！ 2011-12-19 21:54:28

1.你如果用类似于硅胶柱过柱的kit，提取过程不用在冰上进行。
2.整个过程（不包括裂解）如果是用kit过柱估计20-30min即可完成。
3.充分振荡不会让DNA断裂，一点点极其微量是有，但不影响结果。

你所说的药物处理几小时肯定会使RNA有所降解。脾脏属于内源性RNase丰富的组织。不过应该也不至于降解成你电泳图那种程度，我觉得你在提取上还有很大可以提高的地方。

1.电泳不用跑那么久，1%的胶约8v/cm电泳20-25min即可。另外上样量最好控制在100-200ng(小孔)[中孔-500ng]左右。
2.试剂盒的方法一般没有作DNA去除的步骤。如果你要得到无DNA污染的RNA你需要提取出来再另作去DNA的处理，如DNase I 消化。
3.试剂盒的优点在于方便及快捷、一般无氯仿抽提，对于新手来说简单，要求不高。但一般没有经过氯仿抽提容易存在DNA污染。