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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA 条带 和 OD值
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

[求助] DNA 条带 和 OD值

继前面RNA条带和OD值哪个更重要的帖子，我也提一下自己最近实验遇到的问题，请大侠们看看。我是第一次做，遇到这样的问题，不知该怎么解释？

最近从新生裸鼠组织里提 rna（用的试剂盒）  测浓度60ng/ul 测OD值A260/A280=2.0  我没有跑胶看 分装后冻到-80的冰箱里去了   过了不到1周  我今天取了一管 测浓度50ng/ul
  A260/A280=2.15   然后 我用试剂盒（takara）做逆转录 扩cdna   反应后测浓度869ng/ul，OD值A260/A280=2.06， 然后用该cdna模板做pcr（10ul反应体系，cDNA稀释了10倍，加了2ul），设计了4对引物，做了4管， 同样反应结束后测DNA浓度 500ng/ul OD值A60/A280=1.8多  可是跑胶 （我加了7ul 扩增样品，2.5ulbuffer） 却什么都没跑出来 很干净  。为什么测浓度，测OD值都有，却没有条带呢 ？
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1楼 2011-12-17 17:59:44
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

5xiaosh: 回帖置顶 2011-12-20 14:32:56
5xiaosh(金币+2): 我在逆转录反应前测了一下ep管里的反应液OD，500多ng/ul。现在发现是cDNA没有扩出来，因为我没加Rnasin。O(∩_∩)~ 2011-12-20 14:35:59
你扩完的cDNA怎么能测浓度呢？如果你是直接测浓度里面一大堆乱七八糟的东西，测出来的浓度完全没有可信度。
你做PCR的时候加一个阳性对照（actin什么的），你只用你自己设计的四个引物做很难说明问题，可能本来PCR体系或引物就有问题。
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伟大航线....
9楼2011-12-19 10:26:40
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bready

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
5xiaosh(金币+1): 嗯，谢谢。 2011-12-20 14:30:29
很有可能是你的总RNA已经降解了！提取完还是要跑胶检测的！
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加油
2楼2011-12-18 00:28:15
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5xiaosh

银虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by bready at 2011-12-18 00:28:15:
很有可能是你的总RNA已经降解了！提取完还是要跑胶检测的！

谢谢您 RNA电泳  跟DNA 电泳一样吗 ？  有什么特别注意的吗 ？
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3楼2011-12-18 12:19:41
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bready

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度不一样，其他的没有区别，还有你提取的总RNA如果要经常用，要分装！不要经常冻溶！
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加油
4楼2011-12-18 13:40:39
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