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5xiaosh

银虫 (小有名气)

[求助] DNA 条带 和 OD值

继前面RNA条带和OD值哪个更重要的帖子,我也提一下自己最近实验遇到的问题,请大侠们看看。我是第一次做,遇到这样的问题,不知该怎么解释?

最近从新生裸鼠组织里提 rna(用的试剂盒)  测浓度60ng/ul 测OD值A260/A280=2.0  我没有跑胶看 分装后冻到-80的冰箱里去了   过了不到1周  我今天取了一管 测浓度50ng/ul
  A260/A280=2.15   然后 我用试剂盒(takara)做逆转录 扩cdna   反应后测浓度869ng/ul,OD值A260/A280=2.06, 然后用该cdna模板做pcr(10ul反应体系,cDNA稀释了10倍,加了2ul),设计了4对引物,做了4管, 同样反应结束后测DNA浓度 500ng/ul OD值A60/A280=1.8多  可是跑胶 (我加了7ul 扩增样品,2.5ulbuffer) 却什么都没跑出来 很干净  。为什么测浓度,测OD值都有,却没有条带呢 ?
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by zh712ang at 2011-12-18 14:20:20:
RNA电泳注意的事情比较多:电泳槽要除RNase0.5MNaCl浸泡20min,用DEPC水配置缓冲液,高电压短时间跑电泳 总的来说就是减少和RNase接触的时间

0.5MNaCl浸泡电泳槽后的废液  倒哪里呢  因为那槽子可能被EB污染过了  装个瓶子里吗??  我提RNA 测OD 测浓度 都没问题  就是做不出后面的克隆  我都怀疑我的RNA 是不是提出来时就讲解差不多了   才想做这RNA 电泳
7楼2011-12-18 14:51:44
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bready

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
5xiaosh(金币+1): 嗯,谢谢。 2011-12-20 14:30:29
很有可能是你的总RNA已经降解了!提取完还是要跑胶检测的!
加油
2楼2011-12-18 00:28:15
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5xiaosh

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by bready at 2011-12-18 00:28:15:
很有可能是你的总RNA已经降解了!提取完还是要跑胶检测的!

谢谢您 RNA电泳  跟DNA 电泳一样吗 ?  有什么特别注意的吗 ?
3楼2011-12-18 12:19:41
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bready

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

浓度不一样,其他的没有区别,还有你提取的总RNA如果要经常用,要分装!不要经常冻溶!
加油
4楼2011-12-18 13:40:39
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