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liu-xj10

木虫 (小有名气)

[求助] 【求助】材料上的细胞SEM观察

最近要做材料上的细胞的SEM观察,我们组之前都是戊二醛固定后酒精脱水然后自然风干就去看电镜了,不过我看别人都有干燥的过程,我想用叔丁醇冷冻干燥,但是在抽真空的过程对细胞有损伤么?会不会把贴附的细胞抽下来呢?应该不会吧。。。大家有这方面经验么?
另外我想问一下不透明的材料上的细胞经染色后能用倒置光学显微镜看么?效果如何呢?
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红舟流星

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-16 23:18:36
liu-xj10(金币+5): 谢谢交流~ 2011-12-20 13:54:54
SEM不是要喷晶吗?
那个不伤害细胞?
冻干是升华,不怎么伤害细胞的
红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
2楼2011-12-15 23:59:59
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liu-xj10

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 红舟流星 at 2011-12-15 23:59:59:
SEM不是要喷晶吗?
那个不伤害细胞?
冻干是升华,不怎么伤害细胞的

谢谢
我是怕抽真空的时候会对细胞有影响,到达真空度后应该没事了。他们之前做扫描都是自然干燥的,我还是想用叔丁醇用冻干的方法做。
3楼2011-12-16 00:06:01
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红舟流星

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【答案】应助回帖


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-16 23:18:46
引用回帖:
3楼: Originally posted by liu-xj10 at 2011-12-16 00:06:01:
谢谢
我是怕抽真空的时候会对细胞有影响,到达真空度后应该没事了。他们之前做扫描都是自然干燥的,我还是想用叔丁醇用冻干的方法做。

试试材料浸没在溶剂中然后液氮,然后冻干
红楼一梦终难寻扁舟载酒且慢行落花流水依惜别月伴明星照前路
4楼2011-12-16 00:39:26
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duruo

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【答案】应助回帖


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lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-16 23:18:55
liu-xj10(金币+5): 感谢回复。。。金币太少,见谅。。 2011-12-20 13:57:18
看细胞这类生物样品建议还是用环扫吧,对细胞形态影响小一些

说实话,SEM这类需要脱水的仪器本身并不适合看细胞

有条件的话还是荧光染色吧
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
5楼2011-12-16 19:19:30
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walnut23

木虫 (小有名气)

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lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-17 18:19:50
之前抽真空干燥过,感觉没什么影响。
不透光的材料用一般的倒置不行,要用那种侧面发射光的倒置显微镜看,用吖啶橙或者钙绿素之类的染一下就行。
6楼2011-12-17 00:38:18
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rainbows1

禁虫 (著名写手)

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7楼2011-12-17 21:35:00
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jingwang7793

金虫 (小有名气)

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常规i酒精梯度脱水后 真空干燥即可用于SEM样本制备.不是很复杂.
JingWang
8楼2011-12-18 17:11:50
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liu-xj10

木虫 (小有名气)

今天酒精梯度脱水后,用叔丁醇置换,然后冻干机冻干,还挺快的,明天看扫描,看看啥效果~~
9楼2011-12-18 21:05:22
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Florita

金虫 (正式写手)

没用SEM看过细胞,但是用SEM看过胶原纤维组织。一开始时没有冻干,没有喷金,直接抽低真空。放大到5000倍后,纤维根本看不清楚;后来冻干后再去看,还是没有明显的纤维形态。。。在这个过程中我也观察到表面的细胞了,但是因为我不是生物专业的,没没有专门看细胞,不知道有木有损坏。。。希望这些经验可以帮助到你~
10楼2012-04-01 09:23:41
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