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xocl77

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助!用4% 多聚甲醛作为固定液固定MG63细胞,但是做SEM找不到类似细胞形态的东西

本人用4% 多聚甲醛作为固定液固定MG63细胞1小时,之后用50%,60%,70%,80%,90%,100% 的乙醇脱水各15分钟,风干2小时,再真空干燥箱中干燥24小时,但是做SEM找不到细胞,(不管是表面还是孔里面)只看到我多孔材料的结构。附图片,

请教各位大牛指点,这是为什么?

谢谢!!

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scuhuyang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xocl77: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-09 20:21:38
会不会脱水时被冲掉了?另外我们一般做都是用乙酸异戊脂交换乙醇,再进行临界点干燥后喷金

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
坚持到底
2楼2013-04-09 10:17:35
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xocl77

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by scuhuyang at 2013-04-09 10:17:35
会不会脱水时被冲掉了?另外我们一般做都是用乙酸异戊脂交换乙醇,再进行临界点干燥后喷金

谢谢指导!

今天我把还没做SEM的样品用DAPI染色,荧光显微镜下是看到蓝色的细胞核的,证明是有细胞的,没有被冲走。

乙酸异戊脂交换乙醇的目的是什么?我看有些文章没有这步,很可怜的我们没有临界点干燥的机器呢~~
3楼2013-04-09 20:24:50
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scuhuyang

铁杆木虫 (正式写手)

乙酸异戊酯的作用是为了出去乙醇,由于SEM喷金成像时如有水或乙醇存在会严重影响细胞的观察及形貌,因此通常文献里均会用到乙酸异戊酯,因为我也是二把刀,所以具体原理也不太清楚了。临界点干燥则是为了出去乙酸异戊酯,同时保持细胞较好的原有形貌。
坚持到底
4楼2013-04-09 20:39:24
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