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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助！用4% 多聚甲醛作为固定液固定MG63细胞，但是做SEM找不到类似细胞形态的东西
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xocl77

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！用4% 多聚甲醛作为固定液固定MG63细胞，但是做SEM找不到类似细胞形态的东西

本人用4% 多聚甲醛作为固定液固定MG63细胞1小时，之后用50%，60%，70%，80%，90%，100% 的乙醇脱水各15分钟，风干2小时，再真空干燥箱中干燥24小时，但是做SEM找不到细胞，（不管是表面还是孔里面）只看到我多孔材料的结构。附图片，

请教各位大牛指点，这是为什么？

谢谢！！

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1楼 2013-04-08 21:17:41
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scuhuyang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xocl77: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-09 20:21:38
会不会脱水时被冲掉了？另外我们一般做都是用乙酸异戊脂交换乙醇，再进行临界点干燥后喷金

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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坚持到底
2楼2013-04-09 10:17:35
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xocl77

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by scuhuyang at 2013-04-09 10:17:35
会不会脱水时被冲掉了？另外我们一般做都是用乙酸异戊脂交换乙醇，再进行临界点干燥后喷金

谢谢指导！

今天我把还没做SEM的样品用DAPI染色，荧光显微镜下是看到蓝色的细胞核的，证明是有细胞的，没有被冲走。

乙酸异戊脂交换乙醇的目的是什么？我看有些文章没有这步，很可怜的我们没有临界点干燥的机器呢~~
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3楼2013-04-09 20:24:50
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scuhuyang

铁杆木虫 (正式写手)
乙酸异戊酯的作用是为了出去乙醇，由于SEM喷金成像时如有水或乙醇存在会严重影响细胞的观察及形貌，因此通常文献里均会用到乙酸异戊酯，因为我也是二把刀，所以具体原理也不太清楚了。临界点干燥则是为了出去乙酸异戊酯，同时保持细胞较好的原有形貌。
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坚持到底
4楼2013-04-09 20:39:24
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