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woodymm

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】4%的多聚甲醛固定液(Ph 8—9)怎么配 已有3人参与

各位大虾们:
       我在做公鸡的联会复合体实验,其中需要用4%的多聚甲醛进行固定,在文献中有看到鸡需要的是Ph 8-9的4%多聚甲醛,我不知道怎么配,希望大家不吝赐教哈。
PS:4%多聚甲醛用于固定的PH值大概都在多少啊?我有看到很多文献中不指出PH值的,是不是按照配方配后值都一样的啊?若有PH值7.3的配方,我要PH 8的,是不是光用NaOH调一下就可以了啊?
       跪谢各位了。
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一路前行
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2010-12-03 18:13:09
⑴ PBS(pH 8-9):140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
             ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
        10×PBS 1000ml  配方:
                       NaCI          81.8 g
                       KCI           2.0 g
                       Na2HPO4•7H2O   26.81 g
                       KH2PO4                   2.45 g
    800mlddH2O溶解后pH 值6.8,用10N NaOH 调整至pH8-9。定容,过滤,高压灭菌。室温保存。
⑵ 4% 多聚甲醛:300 ml配方
            10×PBS            30 ml
H2O                 270 ml
固体NaOH          0.18 g
            Triton X-100       300μl ( 终浓度为0.1%,可选项)
三角瓶中加入300 ml的 1×PBS,然后置天平上称取固体NaOH,摇动溶解,微波炉加热(600W, 2分钟,一般为60℃)。三角瓶复置于天平上称取多聚甲醛12 g,加入300μl triton(可选),封口,摇至清澈*,冰上冷却至室温,加浓硫酸 调pH至8-9.
2楼2010-12-03 16:42:24
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普通回帖

woodymm

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-12-03 16:42:24:
⑴ PBS(pH 8-9):140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
             ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
        10×PBS 1000ml  配方:
                       NaCI  ...

谢谢啦。那调整PH的时候可不可以用别的酸,比如盐酸什么的啊?这个应该没有影响的吧?
一路前行
3楼2010-12-04 18:01:56
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woodymm

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-12-03 16:42:24:
⑴ PBS(pH 8-9):140 mM NaCI, 2.7 mM KCI, 10 mM Na2HPO4 ,
1.8 mM KH2PO4
             ( Boehringer Mannheim in situ manual, Page 128 )
        10×PBS 1000ml  配方:
                       NaCI  ...

我还想问下,步骤中加入NaOH加热溶解,再加多聚甲醛的时候还是继续在60度中加热溶解吗?另外, Triton X-100 在这个实验中的作用是什么?谢谢了哈。
一路前行
4楼2010-12-05 13:38:44
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


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1. 可以用盐酸
2.利用余温即可溶解多聚甲醛
3.triton x-100为表面活性剂,作用是有利于固定剂均匀展布于样品表面。
5楼2010-12-06 08:26:38
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lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-06 12:11:57
先配你需要PH值的PBS缓冲液,浓度为终浓度的两倍,配方随便Google一下就能找到。
然后配8%PFA水溶液,称取相应质量的PFA,放在水中40度水浴,向里面慢慢加入10N氢氧化纳溶液,加一滴要多震荡几次,不要加多了。直到PFA全部溶解。
将两者等比例混合。

也可以直接用一倍浓度的对应PH值的PBS去溶解PFA,40度水浴几个小时也可以溶解
6楼2010-12-06 11:04:13
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woodymm

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-12-06 08:26:38:
1. 可以用盐酸
2.利用余温即可溶解多聚甲醛
3.triton x-100为表面活性剂,作用是有利于固定剂均匀展布于样品表面。

谢谢你哈。
一路前行
7楼2010-12-08 16:02:30
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woodymm

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lzhwin at 2010-12-06 11:04:13:
先配你需要PH值的PBS缓冲液,浓度为终浓度的两倍,配方随便Google一下就能找到。
然后配8%PFA水溶液,称取相应质量的PFA,放在水中40度水浴,向里面慢慢加入10N氢氧化纳溶液,加一滴要多震荡几次,不要加多了。直 ...

谢谢你哈
一路前行
8楼2010-12-08 16:03:26
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woodymm

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lixg at 2010-12-06 08:26:38:
1. 可以用盐酸
2.利用余温即可溶解多聚甲醛
3.triton x-100为表面活性剂,作用是有利于固定剂均匀展布于样品表面。

您好,请问配置好的多聚甲醛在室温下可以放多久?不至影响实验。
一路前行
9楼2010-12-08 16:19:39
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


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通常为4度保存,只要不产生白色沉淀就能用。没试过室温保存。
10楼2010-12-09 10:29:26
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