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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 材料做SEM,找不到细胞
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wpy890718

铁虫 (小有名气)

[交流] 材料做SEM,找不到细胞 已有9人参与

做细胞活性检测时证明材料上有细胞,但是2.5%的戊二醛固定后梯度脱水,喷金照SEM却找不到细胞,是哪里出了问题
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1楼 2013-05-24 15:09:15
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Aniabia

木虫 (正式写手)
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红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-05-24 21:44:14
先染色，荧光观测看是否有细胞。确定有了过后，再做SEM。
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3楼2013-05-24 17:29:47
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bluern

木虫 (著名写手)
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红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-05-24 21:44:32

和干燥有关。乙醇直接挥发的话，细胞都是一坨坨的。没有啥形貌。不立体~~
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4楼2013-05-24 18:14:57
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wpy890718

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Aniabia at 2013-05-24 17:29:47
先染色，荧光观测看是否有细胞。确定有了过后，再做SEM。

那用荧光染色前用4%的多聚甲醛固定,做扫描电镜前用戊二醛固定,如果用多聚甲醛固定之后,染色,荧光观察之后,还用戊二醛再次固定吗?还是直接干燥喷金
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6楼2013-05-24 21:43:57
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hnulys

新虫 (小有名气)
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红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-05-24 21:44:21
培养多长时间？有可能细胞量太少，找的地方不对
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2楼2013-05-24 16:10:35
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wpy890718

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hnulys at 2013-05-24 16:10:35
培养多长时间？有可能细胞量太少，找的地方不对

1,3,7天分别取出，用的24孔板，每孔30,000个细胞
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5楼2013-05-24 21:40:45
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wpy890718

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bluern at 2013-05-24 18:14:57

和干燥有关。乙醇直接挥发的话，细胞都是一坨坨的。没有啥形貌。不立体~~

那如果没有二氧化碳超临界干燥设备,冻干可以吗,会影响形貌吗?
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7楼2013-05-24 21:45:57
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bluern

木虫 (著名写手)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by wpy890718 at 2013-05-24 21:45:57
那如果没有二氧化碳超临界干燥设备,冻干可以吗,会影响形貌吗?...

偶这里也米有二氧化碳超临界。也是用冻干。效果稍好。马马虎虎~~偶看你上面24孔板，每孔3万个细胞。培养7天的话，密度是不是有点大啊~~
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8楼2013-05-25 16:29:08
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冬暮古雨

金虫 (小有名气)
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您好 我是新手做生物支架的 很多问题不懂 师兄姐们也没做过 想问一下 您是怎么做的细胞活性检测啊？？
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坚持才会有收获
9楼2015-03-31 16:08:23
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冬暮古雨

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bluern at 2013-05-24 18:14:57

和干燥有关。乙醇直接挥发的话，细胞都是一坨坨的。没有啥形貌。不立体~~

那应该怎么干燥啊？
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坚持才会有收获
10楼2015-03-31 16:09:08
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