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shangjie111木虫 (正式写手)
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关于DNA测序末端终止法的一点问题？
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末端终止法，既然是用4种荧光标记的ddNTP去终结DNA的延长，那么，我想能不能把dNTP标记上4种颜色的荧光，在DNA延长的时候加入，最后观察荧光，记录不同的颜色信息，然后我们就知道未知DNA的序列。这样岂不简单一点，不知道为什么不行？希望虫友能够回答我的问题。 [ 来自科研家族 快乐家族 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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gaoyang636
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【答案】应助回帖
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shangjie111(金币+2): 解释的很详细，非常感谢 2011-12-14 10:12:48
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-14 11:06:34
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shangjie111(金币+2): 解释的很详细，非常感谢 2011-12-14 10:12:48
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！ 2011-12-14 11:06:34
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首先，一代测序（Sanger法）现在是仅仅在起终止作用的ddNTP上标记荧光信号，原因是：以ABI的3730为代表的测序仪是以毛细管电泳为技术手段的，同一个模板DNA上机前，进行了PCR，形成了各种长度的片段，最后电泳的时候可以被机器区分判读，最后产出序列信息； 而你说的原理其实就是二代测序的思路，不使用末端终止和电泳了，边合成边测序，每一个碱基加入的时候都有荧光产生，然后机器判断荧光，然后进行下一轮（其实也不尽然，不一定把荧光染料加到dNTP上，可以仅仅利用合成时的能量释放来激发另外的荧光物质(454)，还比如SOLiD--还是ABI，其实是利用的连接反应），想法很好，原理也不难，但是实现起来难度很大，所以直到现在，测序读长还是不能和一代测序相比，错误率也不低； 正在开发中的三代测序就进一步了，（二代抛弃了电泳@_@），抛弃荧光和光学检测系统……这个就不赘言了 anyway，能多想想挺不错的，鼓励一下；以后要不但会想，而且会查阅资料哈  |
9楼2011-12-14 09:47:06
shaquila
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2楼2011-12-13 21:36:22
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